藥品微生物學檢驗技術的核心原則與檢驗要點及質(zhì)量控制！
小楊 / 2025-10-27 09:47:33
百歐博偉生物：藥品微生物學檢驗技術是保障藥品質(zhì)量與用藥安全的核心技術之一，主要用于檢測藥品及其生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的微生物污染，包括微生物的種類、數(shù)量及潛在風險。以下從檢驗原則、具體技術細節(jié)、應用場景及質(zhì)量控制等方面進一步展開說明：
一、檢驗核心原則
代表性：樣品采集需覆蓋藥品全批次、生產(chǎn)關鍵環(huán)節(jié)（如灌裝區(qū)、潔凈室），確保檢驗結果能反映整體污染狀況。例如，大容量注射劑需隨機抽取不同生產(chǎn)日期、不同包裝的樣品。
無菌操作：檢驗過程需在 Class 100（ISO 5 級）潔凈環(huán)境中進行（如生物安全柜或隔離器），避免環(huán)境微生物干擾，尤其是無菌檢查和高風險制劑的檢驗。
方法適用性：檢驗方法需經(jīng)過驗證，確保能有效檢出目標微生物，同時排除藥品中抑菌成分的干擾。例如，含抑菌劑的口服液需通過薄膜過濾法去除抑菌成分后再培養(yǎng)。
二、關鍵檢驗技術詳解
（一）無菌檢查（針對無菌制劑）
無菌制劑（如注射劑、輸液、植入劑）要求絕對無菌，是藥品微生物檢驗中最嚴格的項目之一。
檢驗方法：
直接接種法：將樣品直接加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（培養(yǎng)厭氧菌和需氧菌）和改良馬丁培養(yǎng)基（培養(yǎng)真菌），30-35℃培養(yǎng) 14 天（中國藥典標準），觀察培養(yǎng)基是否渾濁或產(chǎn)生沉淀。
薄膜過濾法：適用于含抑菌成分的樣品，通過濾膜（孔徑 0.45μm）截留微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中培養(yǎng)，提高檢出率。
陽性對照驗證：每批檢驗需同時接種陽性菌（如
金黃色葡萄球菌、
生孢梭菌），確認培養(yǎng)基和操作的有效性；陰性對照（無菌稀釋液）需無微生物生長，排除環(huán)境污染。
（二）微生物限度檢查（針對非無菌制劑）
非無菌制劑允許存在一定數(shù)量的微生物，但需控制在安全范圍內(nèi)，且不得檢出特定致病菌。
總菌數(shù)計數(shù)：
細菌總數(shù)：用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，30-35℃培養(yǎng) 48 小時，計數(shù)菌落形成單位（CFU），結果以“CFU/g（或 mL）”表示。例如，口服固體制劑細菌總數(shù)不得過 10³ CFU/g（具體限值依藥典規(guī)定）。
霉菌和酵母菌總數(shù)：用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，20-25℃培養(yǎng) 5 天，防止真菌毒素污染。
控制菌檢查：
大腸桿菌：作為腸道致病菌指示菌，口服藥品需嚴格控制。檢驗時通過麥康凱瓊脂篩選（菌落呈紅色、圓形），再經(jīng)靛基質(zhì)試驗（陽性）確認。
金黃色葡萄球菌：易引發(fā)皮膚感染，外用制劑需檢查。采用甘露醇氯化鈉瓊脂（菌落黃色、周圍培養(yǎng)基變黃），結合血漿凝固酶試驗（陽性）鑒定。
銅綠假單胞菌：對眼部有強致病性，眼用制劑需禁止檢出。通過十六烷基三甲基溴化銨瓊脂（菌落綠色、有金屬光澤），及氧化酶試驗（陽性）確認。
（三）現(xiàn)代快速檢測技術應用
核酸擴增技術（PCR）：
原理：通過特異性引物擴增微生物的保守基因，實現(xiàn)快速定性/定量。例如，檢測
沙門氏菌時，靶向 invA 基因，3 小時內(nèi)可出結果。
優(yōu)勢：靈敏度達 1 CFU / 樣品，適合低污染水平的藥品檢測。
ATP 生物發(fā)光法：
用于生產(chǎn)環(huán)境（如設備表面、操作人員手部）的快速衛(wèi)生監(jiān)控。通過檢測活菌釋放的 ATP 與熒光素酶反應產(chǎn)生的光強度，10 分鐘內(nèi)判斷污染程度（RLU 值越低，衛(wèi)生狀況越好）。
MALDI-TOF 質(zhì)譜：
對培養(yǎng)后的菌落進行蛋白質(zhì)指紋圖譜分析，與數(shù)據(jù)庫比對可在 15 分鐘內(nèi)鑒定至種屬水平（如區(qū)分
金黃色葡萄球菌與
表皮葡萄球菌），大幅縮短傳統(tǒng)生化鑒定的時間（傳統(tǒng)需 2-3 天）。
三、特殊藥品的檢驗要點
中藥材/中藥飲片：
因來源天然（土壤、植物），易攜帶霉菌和昆蟲病原體（如
沙門氏菌）。檢驗時需先經(jīng)均質(zhì)化處理，再用稀釋法計數(shù)，控制菌需重點檢查沙門氏菌和霉菌。
抗生素類藥品：
自身含抑菌成分，需用中和劑（如青霉素酶中和青霉素）或加大稀釋倍數(shù)（1:1000 以上）消除干擾，再進行無菌檢查或限度檢查。
凍干制劑：
需先復溶（用無菌注射用水），再按注射劑標準進行無菌檢查，避免凍干過程中可能殘留的芽孢污染。
四、質(zhì)量控制與方法驗證
培養(yǎng)基驗證：
每批培養(yǎng)基需做無菌性檢查（30-35℃培養(yǎng) 14 天無菌生長），并驗證促生長能力（接種 10-100 CFU 的目標菌，回收率需≥70%）。
方法適用性試驗：
確認樣品對微生物無抑制作用。例如，檢測某口服液的細菌總數(shù)時，需向樣品中加入 10-100 CFU 的大腸桿菌，若回收率≥70%，說明方法適用；否則需調(diào)整樣品處理方式（如增加稀釋倍數(shù)）。
實驗室質(zhì)量控制：
定期參加能力驗證（如國家藥監(jiān)局組織的微生物檢驗比對），確保檢驗結果的準確性；操作人員需持證上崗，避免操作誤差。
五、法規(guī)與標準更新
各國藥典對微生物檢驗的要求持續(xù)優(yōu)化，例如：
中國藥典（2025 年版）擬縮短無菌檢查培養(yǎng)時間（從 14 天減至 7 天），采用更靈敏的快速培養(yǎng)技術；
美國藥典（USP）<1223> 強調(diào)“風險基于的微生物控制”，要求結合生產(chǎn)過程分析技術（PAT）實時監(jiān)控污染風險。
藥品微生物學檢驗技術的發(fā)展始終以“快速、準確、靈敏”為目標，既依賴傳統(tǒng)方法的穩(wěn)定性，也需融合分子生物學、儀器分析等現(xiàn)代技術，最終實現(xiàn)對藥品微生物污染的全鏈條、精準化控制，為用藥安全筑牢防線。
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