實(shí)驗(yàn)室中制備選擇性培養(yǎng)基的具體步驟及關(guān)鍵注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-10-20 09:56:55
百歐博偉生物：選擇性培養(yǎng)基通過(guò)添加特定抑制劑或營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，抑制非目標(biāo)微生物生長(zhǎng)，同時(shí)促進(jìn)目標(biāo)菌繁殖，常用于分離特定細(xì)菌（如腸道致病菌、耐藥菌等）。以下以SS 瓊脂培養(yǎng)基（用于分離
沙門(mén)氏菌和
志賀氏菌）和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（用于分離革蘭氏陰性桿菌，尤其是
大腸桿菌）為例，介紹實(shí)驗(yàn)室制備步驟。
一、SS 瓊脂培養(yǎng)基（Salmonella-Shigella Agar）
1、用途
2、材料準(zhǔn)備
配方（1000mL）：
基礎(chǔ)成分：蛋白胨 5g、牛肉膏 5g、乳糖 10g、膽鹽 8.5g、檸檬酸鈉 8.5g、硫代硫酸鈉 8.5g、瓊脂 15g、蒸餾水 1000mL。
抑制劑與指示劑：1% 中性紅溶液 2.5mL、0.1% 煌綠溶液 0.33mL（兩者均需過(guò)濾除菌）。
儀器：電子天平、燒杯、pH 計(jì)、高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌移液管、平皿等。
3、具體步驟
（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
稱(chēng)取蛋白胨、牛肉膏、乳糖、膽鹽、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉、瓊脂，加入 800mL 蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解（瓊脂需煮沸溶解）。
補(bǔ)加蒸餾水至 1000mL，調(diào)節(jié) pH 至 7.0±0.1（滅菌后 pH 會(huì)略降，需精確控制）。
（2）分裝與滅菌
將基礎(chǔ)培養(yǎng)基分裝至錐形瓶，121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘，取出后置于 50-60℃水浴中保溫（避免瓊脂凝固）。
（3）添加抑制劑和指示劑
在超凈工作臺(tái)中，用無(wú)菌移液管吸取 1% 中性紅溶液 2.5mL 和 0.1% 煌綠溶液 0.33mL（兩者均需提前用 0.22μm 濾膜過(guò)濾除菌），加入保溫的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，輕輕混勻（避免氣泡產(chǎn)生）。
注意：煌綠和膽鹽是強(qiáng)抑制劑，過(guò)量會(huì)抑制目標(biāo)菌，需嚴(yán)格按比例添加。
（4）倒平板
迅速將混勻的培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平皿（每皿約 15-20mL），待凝固后倒置，4℃避光保存（煌綠遇光易分解，保存時(shí)間不超過(guò) 1 周）。
二、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacConkey Agar）
1、用途
2、材料準(zhǔn)備
配方（1000mL）：
基礎(chǔ)成分：蛋白胨 20g、乳糖 10g、膽鹽 5g、氯化鈉 5g、瓊脂 17g、蒸餾水 1000mL。
指示劑：1% 中性紅溶液 3mL、0.5% 結(jié)晶紫溶液 1mL（結(jié)晶紫需過(guò)濾除菌）。
儀器：同 SS 瓊脂。
3、具體步驟
（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
稱(chēng)取蛋白胨、乳糖、膽鹽、氯化鈉、瓊脂，加入 800mL 蒸餾水，加熱攪拌至完全溶解，補(bǔ)加蒸餾水至 1000mL。
調(diào)節(jié) pH 至 7.4±0.1（用 pH 計(jì)測(cè)量）。
（2）分裝與滅菌
分裝后 121℃滅菌 15 分鐘，取出后 50-60℃水浴保溫。
（3）添加指示劑
超凈工作臺(tái)中，加入 1% 中性紅溶液 3mL 和 0.5% 結(jié)晶紫溶液 1mL（結(jié)晶紫需過(guò)濾除菌），混勻（結(jié)晶紫可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，膽鹽輔助抑制）。
（4）倒平板
倒平板后凝固，4℃保存（可存放 2 周，避免干燥）。
三、選擇性培養(yǎng)基制備關(guān)鍵注意事項(xiàng)
1、抑制劑的處理
熱不穩(wěn)定的抑制劑（如煌綠、結(jié)晶紫）需過(guò)濾除菌（0.22μm 濾膜），待基礎(chǔ)培養(yǎng)基滅菌后冷卻至 50-60℃時(shí)無(wú)菌添加，避免高溫破壞。
熱穩(wěn)定的抑制劑（如膽鹽）可直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基一同滅菌。
2、濃度控制
抑制劑濃度需嚴(yán)格按配方：過(guò)低無(wú)法抑制雜菌，過(guò)高會(huì)抑制目標(biāo)菌（如 SS 瓊脂中煌綠濃度過(guò)高會(huì)抑制
沙門(mén)氏菌）。
3、無(wú)菌操作
倒平板、添加抑制劑時(shí)需在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，避免雜菌污染導(dǎo)致選擇性失效。
4、pH 調(diào)節(jié)
目標(biāo)菌對(duì) pH 敏感時(shí)（如
乳酸菌），需精確調(diào)節(jié)，避免因 pH 不當(dāng)影響生長(zhǎng)。
5、驗(yàn)證試驗(yàn)
制備后需用標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)證：目標(biāo)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，雜菌應(yīng)被抑制（如麥康凱瓊脂上大腸桿菌生長(zhǎng)，葡萄球菌不生長(zhǎng)）。
通過(guò)以上步驟，可制備出能有效選擇性分離目標(biāo)菌的培養(yǎng)基。不同選擇性培養(yǎng)基的核心差異在于抑制劑種類(lèi)（針對(duì)非目標(biāo)菌）和營(yíng)養(yǎng)成分（適配目標(biāo)菌），需根據(jù)具體分離對(duì)象調(diào)整配方。
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