菌落總數(shù)檢測的操作細(xì)節(jié)與注意事項及標(biāo)準(zhǔn)化流程！
小楊 / 2025-06-06 10:14:25
百歐博偉生物：菌落總數(shù)檢測是評估樣品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，操作中需嚴(yán)格遵循無菌原則和標(biāo)準(zhǔn)化流程。以下是關(guān)鍵注意細(xì)節(jié)，分步驟說明：
一、樣品處理與稀釋
1、無菌操作
全程在超凈工作臺或生物安全柜中進(jìn)行，穿戴無菌手套、口罩，避免人為污染。
樣品容器需滅菌，開封后立即檢測，防止環(huán)境微生物污染。
2、樣品均質(zhì)
固體/半固體樣品：用滅菌均質(zhì)袋或研磨器充分均質(zhì)（如拍擊式均質(zhì)器），確保細(xì)菌分布均勻。
液體樣品：搖勻后直接取樣，含顆粒物需過濾或再次均質(zhì)。
3、稀釋液選擇與使用
使用0.85%生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（pH 7.2），預(yù)先冷卻至0-4℃（抑制微生物增殖）。
每稀釋一次更換無菌吸管或槍頭，避免交叉污染。
稀釋順序：從低濃度到高濃度（如原液→10?¹→10?²），避免誤差傳遞。
二、培養(yǎng)基制備與接種
1、培養(yǎng)基質(zhì)量控制
選擇平板計數(shù)瓊脂（PCA）或其他標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，滅菌后pH應(yīng)為7.0±0.2。
滅菌后冷卻至45-50℃傾注，溫度過高會殺死微生物，過低易凝固不均。
2、傾注與混勻
每皿倒入15-20mL培養(yǎng)基，迅速旋轉(zhuǎn)平皿8-10次，確保樣品與培養(yǎng)基充分混合。
凝固后倒置培養(yǎng)，防止冷凝水浸潤菌落。
三、培養(yǎng)條件
1、溫度與時間
常規(guī)培養(yǎng)：36±1℃，48小時；部分標(biāo)準(zhǔn)需30℃培養(yǎng)72小時（如環(huán)境樣品）。
培養(yǎng)箱濕度維持60%-70%，避免培養(yǎng)基干燥。
2、擺放方式
平板倒置，單層擺放，留出空隙保證空氣流通，避免堆疊導(dǎo)致局部溫度不均。
四、菌落計數(shù)與記錄
1、計數(shù)規(guī)則
選擇菌落數(shù)30-300的平板（GB 4789.2標(biāo)準(zhǔn)），低于30記錄實際數(shù)，高于300記為“多不可計”。
多個稀釋度均符合范圍時，取平均值（如兩稀釋度菌落數(shù)均在30-300，按公式計算）。
2、區(qū)分干擾物
用放大鏡或菌落計數(shù)器輔助，排除氣泡、雜質(zhì)；疑似蔓延菌落需標(biāo)記說明。
若超過1/4平板被蔓延菌覆蓋，應(yīng)重新檢測。
五、結(jié)果計算與報告
1、計算公式
檢測的操作細(xì)節(jié)與注意事項及標(biāo)準(zhǔn)化流程.png)
2、有效數(shù)字與單位
結(jié)果保留兩位有效數(shù)字（如1.2×10? CFU/g），單位需明確（CFU/mL或CFU/g）。
六、質(zhì)量控制
1、空白對照
每批次設(shè)空白對照（僅加稀釋液），若出現(xiàn)菌落需排查污染源。
2、陽性對照
使用已知菌株（如大腸埃希氏菌）驗證培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件有效性。
3、儀器校準(zhǔn)
定期校準(zhǔn)移液器、培養(yǎng)箱溫度計、均質(zhì)器等，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
七、安全與廢棄物處理
生物安全：潛在致病菌樣品需在生物安全二級實驗室處理。
廢棄物滅菌：使用后的培養(yǎng)基、樣品需121℃高壓滅菌30分鐘后再丟棄。
八、常見問題與解決
菌落過多/過少：檢查稀釋度選擇、培養(yǎng)基滅菌效果或樣品保存條件。
蔓延菌落：傾注后快速凝固，減少開蓋時間；使用含TTC的培養(yǎng)基抑制蔓延。
通過嚴(yán)格把控上述細(xì)節(jié)，可顯著提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。實際操作中需結(jié)合具體標(biāo)準(zhǔn)靈活調(diào)整，確保合規(guī)性。
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