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常見(jiàn)的微生物涂抹方法與操作步驟及適用場(chǎng)景有哪些?
小楊 / 2025-05-06 10:12:19

 

百歐博偉生物:微生物涂抹方法是一種常用的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),主要用于將微生物樣本均勻涂布在固體培養(yǎng)基表面,以進(jìn)行分離純化、菌落計(jì)數(shù)或培養(yǎng)觀察。以下是常見(jiàn)的微生物涂抹方法及操作步驟:
 
一、常見(jiàn)方法
 
1、劃線法(平板劃線法)
 
目的:分離單菌落,純化微生物。
 
步驟:
 
接種環(huán)灼燒滅菌,冷卻后蘸取菌液。
 
在培養(yǎng)基表面分區(qū)劃線(如四區(qū)法),每劃完一區(qū)需灼燒接種環(huán),冷卻后再劃下一區(qū)。
 
培養(yǎng)后,最后一區(qū)可形成單菌落。
 
2、涂布棒法(玻璃涂布法)
 
目的:均勻涂布菌液,適用于菌落計(jì)數(shù)或高通量實(shí)驗(yàn)。
 
步驟:
 
用移液槍吸取一定體積的菌液(如100 μL)滴在培養(yǎng)基表面。
 
將滅菌后的玻璃涂布棒(L型棒)浸入酒精并灼燒,冷卻后輕輕涂抹菌液,旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿使菌液均勻分布。
 
3、傾注法(混合涂布法)
 
目的:用于厭氧菌或需均勻分布的菌落培養(yǎng)。
 
步驟:
 
將菌液與熔化的瓊脂培養(yǎng)基(約45°C)混合,搖勻后倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿。
 
凝固后培養(yǎng),菌落會(huì)均勻分布在培養(yǎng)基內(nèi)部及表面。
 
二、操作注意事項(xiàng)
 
1、無(wú)菌操作:
 
全程在酒精燈火焰旁操作,避免雜菌污染。
 
接種環(huán)、涂布棒需灼燒滅菌,冷卻后再接觸菌液。
 
2、均勻涂布:
 
涂布時(shí)避免用力過(guò)猛破壞培養(yǎng)基表面。
 
菌液量不宜過(guò)多(通常≤200 μL),否則難以干燥。
 
3、標(biāo)記與培養(yǎng):
 
培養(yǎng)皿底部標(biāo)記實(shí)驗(yàn)信息(菌種、日期、稀釋度等)。
 
根據(jù)微生物類(lèi)型選擇適宜溫度和時(shí)間進(jìn)行倒置培養(yǎng)。
 
三、適用場(chǎng)景
 
 
四、常見(jiàn)問(wèn)題
 
1、污染問(wèn)題:
 
培養(yǎng)后出現(xiàn)雜菌,需檢查操作環(huán)境或滅菌流程。
 
2、涂布不均勻:
 
菌液未完全干燥時(shí)移動(dòng)培養(yǎng)皿,或涂布棒未充分旋轉(zhuǎn)。
 
3、菌落過(guò)密/過(guò)少:
 
調(diào)整菌液濃度(通過(guò)梯度稀釋優(yōu)化)。
 
通過(guò)選擇合適的涂抹方法并規(guī)范操作,可高效獲得目標(biāo)微生物的純培養(yǎng)物或準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 
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