常見的微生物涂抹方法與操作步驟及適用場景有哪些？
小楊 / 2025-05-06 10:12:19
百歐博偉生物：微生物涂抹方法是一種常用的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，主要用于將微生物樣本均勻涂布在固體培養(yǎng)基表面，以進(jìn)行分離純化、菌落計(jì)數(shù)或培養(yǎng)觀察。以下是常見的微生物涂抹方法及操作步驟：
一、常見方法
1、劃線法（平板劃線法）
目的：分離單菌落，純化微生物。
步驟：
接種環(huán)灼燒滅菌，冷卻后蘸取菌液。
在培養(yǎng)基表面分區(qū)劃線（如四區(qū)法），每劃完一區(qū)需灼燒接種環(huán)，冷卻后再劃下一區(qū)。
培養(yǎng)后，最后一區(qū)可形成單菌落。
2、涂布棒法（玻璃涂布法）
目的：均勻涂布菌液，適用于菌落計(jì)數(shù)或高通量實(shí)驗(yàn)。
步驟：
用移液槍吸取一定體積的菌液（如100 μL）滴在培養(yǎng)基表面。
將滅菌后的玻璃涂布棒（L型棒）浸入酒精并灼燒，冷卻后輕輕涂抹菌液，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿使菌液均勻分布。
3、傾注法（混合涂布法）
目的：用于厭氧菌或需均勻分布的菌落培養(yǎng)。
步驟：
將菌液與熔化的瓊脂培養(yǎng)基（約45°C）混合，搖勻后倒入無菌培養(yǎng)皿。
凝固后培養(yǎng)，菌落會均勻分布在培養(yǎng)基內(nèi)部及表面。
二、操作注意事項(xiàng)
1、無菌操作：
全程在酒精燈火焰旁操作，避免雜菌污染。
接種環(huán)、涂布棒需灼燒滅菌，冷卻后再接觸菌液。
2、均勻涂布：
涂布時避免用力過猛破壞培養(yǎng)基表面。
菌液量不宜過多（通常≤200 μL），否則難以干燥。
3、標(biāo)記與培養(yǎng)：
培養(yǎng)皿底部標(biāo)記實(shí)驗(yàn)信息（菌種、日期、稀釋度等）。
根據(jù)微生物類型選擇適宜溫度和時間進(jìn)行倒置培養(yǎng)。
三、適用場景
四、常見問題
1、污染問題：
培養(yǎng)后出現(xiàn)雜菌，需檢查操作環(huán)境或滅菌流程。
2、涂布不均勻：
菌液未完全干燥時移動培養(yǎng)皿，或涂布棒未充分旋轉(zhuǎn)。
3、菌落過密/過少：
調(diào)整菌液濃度（通過梯度稀釋優(yōu)化）。
通過選擇合適的涂抹方法并規(guī)范操作，可高效獲得目標(biāo)微生物的純培養(yǎng)物或準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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