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小楊 / 2024-11-08 09:09:40
百歐博偉生物：菌落計(jì)數(shù)反映食品衛(wèi)生質(zhì)量，常用平板菌落計(jì)數(shù)法。確保結(jié)果有效需做空白對(duì)照、檢測(cè)環(huán)境、滅菌處理。提高準(zhǔn)確性需樣品消毒、選合適稀釋度。培養(yǎng)后倒置平板防菌落蔓延，異?，F(xiàn)象按標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)。
菌落計(jì)數(shù)
菌落總數(shù)就是指在一定條件下(如需氧情況、營(yíng)養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等)每克(每毫升)檢樣所生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)菌菌落總數(shù)。
菌落計(jì)數(shù)是用來(lái)判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過(guò)程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。
目前，菌落計(jì)數(shù)一般采用的是平板菌落計(jì)數(shù)法，是種統(tǒng)計(jì)物品含菌數(shù)的有效方法。
在常規(guī)的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，不管是食品衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測(cè)，還是藥品微生物限度檢查，還是研究活性物質(zhì)的抑菌性能實(shí)驗(yàn)，都常常需要對(duì)樣品中的微生物進(jìn)行定量或者濃度計(jì)算；眾多微生物定量方法中最常用的就是對(duì)培養(yǎng)后的培養(yǎng)皿上所生長(zhǎng)菌落進(jìn)行總數(shù)統(tǒng)計(jì)的菌落總數(shù)統(tǒng)計(jì)定量方法。
關(guān)于計(jì)數(shù)的困擾
1、如何保證檢測(cè)結(jié)果的有效性？
設(shè)計(jì)空白對(duì)照
（1）檢驗(yàn)過(guò)程中需要做空白對(duì)照，用來(lái)判斷培養(yǎng)基、稀釋液、平皿或吸管是否存在污染，完美的空白試驗(yàn)平板上應(yīng)該無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求
（2）定期檢測(cè)空氣潔凈度，判斷實(shí)驗(yàn)環(huán)境是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求。
滅菌處理
（3）細(xì)菌檢測(cè)過(guò)程中所用到的一切用具和培養(yǎng)基都需經(jīng)過(guò)滅菌程序。
2、如何提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性？
樣品消毒
（1）任何樣品在打開(kāi)包裝前，都要在取樣開(kāi)口處的周?chē)砻孢M(jìn)行消毒。
（2）采樣時(shí)對(duì)于易堵塞吸管的樣品（如糕點(diǎn)面包辣條等），可以放置一塊無(wú)菌紗布在放樣液的容器瓶口下方，作過(guò)濾用。
稀釋度選擇
樣品的稀釋是菌落計(jì)數(shù)的關(guān)鍵步驟之一。對(duì)于固體或半固體樣品，通常需要將樣品均質(zhì)化后進(jìn)行系列稀釋。建議使用無(wú)菌的生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)⒋_保每次稀釋后的樣品均勻混合。對(duì)于液體樣品，可以直接進(jìn)行稀釋?zhuān)瑯有枰⒁饣旌暇鶆蛐?。選擇合適的稀釋度非常重要，一般建議選擇2-3個(gè)適宜的稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，以確保最終的菌落數(shù)在可計(jì)數(shù)范圍內(nèi)（30-300 CFU）。
參考值
參考值可能是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)累積的估算數(shù)，也可能是樣品本身標(biāo)注的活菌數(shù)值。對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)的操作者而言，即使沒(méi)有明確的參考值，也能憑借經(jīng)驗(yàn)準(zhǔn)確進(jìn)行稀釋操作。然而，對(duì)于新手來(lái)說(shuō)，缺乏參考值的情況下可能會(huì)感到迷茫。
在進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時(shí)，首先盡可能獲取參考值。根據(jù)參考值，可以選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，然后將適量的樣品與適量的培養(yǎng)基混合，并進(jìn)行均勻涂布。如此一來(lái)，可以保證每個(gè)培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)量在合適的范圍內(nèi)，從而得到準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。
擴(kuò)大計(jì)數(shù)范圍
選擇合適的稀釋倍數(shù)和擴(kuò)大計(jì)數(shù)范圍是至關(guān)重要的。一種常見(jiàn)的策略是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或參考值將樣品稀釋到一定倍數(shù)，然后在不同梯度上進(jìn)行涂布。例如，稀釋到10^-8的樣品可以選擇不同梯度的平板進(jìn)行涂布，比如10^-8、10^-7、10^-6各三個(gè)平板。同時(shí)，也可以選擇其他梯度如10^-9、10^-5、10^-4各一個(gè)平板，并留出一個(gè)對(duì)照平板。
不同的食品其「菌落總數(shù)」的檢出限量也不一致，通常糕點(diǎn)類(lèi)樣品中細(xì)菌量偏低，稀釋度應(yīng)選擇較小的，稀釋度可選1:10 。
其次，培養(yǎng)基的選擇和準(zhǔn)備也是影響菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的重要因素。平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）是常用的培養(yǎng)基之一，其滅菌條件為121℃、15分鐘。在傾注培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)確保培養(yǎng)基溫度適宜（約46℃），以避免高溫對(duì)微生物的殺傷作用。此外，對(duì)于一些特殊樣品，可以在培養(yǎng)基中加入適量的2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC），以便在培養(yǎng)后將菌落染色，方便計(jì)數(shù)。
3、為什么瓊脂凝固后需要倒置？
平板倒置培養(yǎng)，可以減少培養(yǎng)基中水分的蒸發(fā)影響細(xì)菌生長(zhǎng)，又可以防止凝結(jié)在皿蓋上的水蒸氣流到培養(yǎng)基表面導(dǎo)致染菌出現(xiàn)菌落蔓延及難以計(jì)數(shù)。
4、菌落蔓延的原因及解決辦法？
菌落蔓延主要有兩個(gè)原因，一是操作不當(dāng)；二是樣品中含有變形桿菌等運(yùn)動(dòng)性強(qiáng)的細(xì)菌。
操作中需要注意3個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：
（1）傾注培養(yǎng)基時(shí)搖晃平皿使其混合均勻，減少菌塊；
（2）樣品稀釋后，盡快傾注平板。從稀釋到傾注結(jié)束時(shí)間控制在30分鐘之內(nèi)，避免樣液干涸造成菌落成團(tuán)；平板凝固后馬上倒置；
（3）若樣品中含有變形桿菌，則可以覆蓋一層培養(yǎng)基（約4mL）。
5、異?，F(xiàn)象平板如何進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)？
在完成培養(yǎng)后應(yīng)立即進(jìn)行計(jì)數(shù)，通常選取30-300CFU菌落數(shù)、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板作為計(jì)數(shù)，但實(shí)際操作中會(huì)出現(xiàn)各種異?，F(xiàn)象。
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