一. 液體培養(yǎng)基貯存于4℃冰箱，避免光照，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前放在37℃ 水槽中溫?zé)帷?
二. 液體培養(yǎng)基（加血清）存放期為六個(gè)月，期間glutamine可能會(huì)分解，若細(xì)胞生長(zhǎng)不佳，可以再添加適量glutamine。
三. 粉末培養(yǎng)基配制(以1 升為例)：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10%血清，因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900 ml，pH為7.2-7.4。NaHCO3 為另外添加，若將NaHCO3粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會(huì)造成pH之誤差，或局部過(guò)堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3粉末應(yīng)分別溶解后才混合，然后用CO2氣體調(diào)整pH，而非用強(qiáng)酸(HCl)或強(qiáng)堿(NaOH)，因?yàn)槁入x子對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)可能有影響，且貯存時(shí)培養(yǎng)基的pH易發(fā)生改變。
2. 材料：
純水（milli-Q水或二次至三次蒸餾水，水品質(zhì)非常重要），粉末培養(yǎng)基，NaHCO3，電磁攪拌器，無(wú)菌血清瓶，0.1或0.2 mm無(wú)菌過(guò)濾膜，pH計(jì)，真空泵，CO2氣體
3. 步驟：
（1） 取粉末培養(yǎng)基溶于700 ml milli-Q水中，攪拌使其溶解。
（2） 稱取適量之NaHCO3粉末溶于200ml milli-Q水中，攪拌使其溶解，然后通入CO2 氣體至飽和，約3-5分鐘。
（3） 將溶解且含飽和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液體培養(yǎng)基中混合。混后溶液之pH應(yīng)為7.2-7.4，除非pH值偏差太大，否則不需用酸堿再調(diào)整之。若為太堿，可再通入CO2氣體調(diào)整pH。培養(yǎng)基以真空幫浦通過(guò)過(guò)濾膜時(shí)，pH會(huì)升高0.1-0.2。
（4）以0.1或0.2 mm無(wú)菌過(guò)濾膜過(guò)濾滅菌，同時(shí)分裝至無(wú)菌容器中，標(biāo)示培養(yǎng)基種類、日期、瓶號(hào)等，貯存于4℃。(血清亦可加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾)
（5） 配制之培養(yǎng)基配制須作生長(zhǎng)試驗(yàn)與污染測(cè)試。
附-配制培養(yǎng)基之生長(zhǎng)測(cè)試
材料：
MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
6-well TC plate (or 35 mm TC dish)
methanol
glacial acetic acid
10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)
步驟：
1. 以待測(cè)試培養(yǎng)基培養(yǎng)MDCKcell，接種MDCK 細(xì)胞于6-well plate (或35mm TC dish) 中，每個(gè)well 接種1 × 102 活細(xì)胞，同時(shí)作對(duì)照組實(shí)驗(yàn)。
2. 接種5～7 天后，在100 倍倒立顯微鏡作觀察細(xì)胞群落之生長(zhǎng)，待細(xì)胞群落大到可以肉眼觀察，而群落間不互相接觸時(shí)即可。
3. 去除培養(yǎng)基，加入1 mlCarnoy’s 固定液(甲醇：冰醋酸﹦ 3:1)，室溫下靜置10 min。
4. 去除固定液，水洗二次。
5. 加入1 ml 10 %Giemsa solution，，室溫下靜置染色2-3min。
6. 去除染液，水洗二次。
7. 以肉眼計(jì)數(shù)群落數(shù)，并比較之，若新配制或新批號(hào)的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不佳，則丟棄之。
中國(guó)微生物查詢網(wǎng)（family998.com）