一、基本信息
平臺(tái)編號(hào)：bio-089797
規(guī)格： 1*10E6
拉丁屬名：Mouse Hippocampal Neurons
中文名：HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞
細(xì)胞用途：僅供科研使用
二、細(xì)胞特性
1） 來(lái)源：小鼠，海馬神經(jīng)元
2） 形態(tài)：貼壁生長(zhǎng)
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
三、運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
四、細(xì)胞接受后的處理
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的完全培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（80%-90%）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
5）接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
五、細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程
1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2.細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
六、HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞凍存步驟：我們實(shí)驗(yàn)室是按1:3:6 配凍存液1份甘油3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用什么培養(yǎng)基凍存時(shí)就用什么培養(yǎng)基):
⑴ 吸出舊培養(yǎng)液加PBS沖洗一次
⑵ 胰酶消化
⑶ 加培養(yǎng)基中止消化，有的細(xì)胞是加血清中止
⑷ 離心收集細(xì)胞，不同細(xì)胞離心率不一樣（以上僅為貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞收集就用第四部）
⑸ 吸出離心管上清液，加1ML 的凍存液重懸細(xì)胞，移到凍存管，放4度半小時(shí)，-20度兩小時(shí)，-70度過(guò)夜，再放液氮長(zhǎng)期保存。
七、HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟如下：
1.將培養(yǎng)基置于37℃回溫，回溫后將其用75%酒精擦拭，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)；
2.戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套之后，從液氮罐中取出細(xì)胞冷凍管。若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，放入37-40℃水浴中，并不時(shí)搖動(dòng)，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，轉(zhuǎn)移到已加入10ml培養(yǎng)液的離心管內(nèi)；
3.在1,000 rpm下離心5～10分鐘，棄去上清液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，置 5% CO2溫箱靜置培養(yǎng)；
4.次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況。若細(xì)胞密度較高，及時(shí)傳代；否則，及時(shí)更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
八、HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)如下：
A.復(fù)蘇細(xì)胞請(qǐng)一定要注意安全，尤其是來(lái)自客戶的細(xì)胞。在放入液氮容器之前就應(yīng)該檢查凍存管是否擰緊。取出復(fù)蘇時(shí)若有液氮進(jìn)入，請(qǐng)一定要擰松凍存管，排出液氮，防止溫度升高時(shí)爆炸。
B.細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需使用指定培養(yǎng)液。絕大多數(shù)細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同，須以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
C.細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)可以暫時(shí)不使用抗生素（G418等），以利于細(xì)胞的恢復(fù)。
D.細(xì)胞復(fù)蘇前需檢查恒溫水浴鍋的溫度是否已經(jīng)適宜。