嗜熱鏈球菌抑制法檢測(cè)鮮乳中抗生素殘留！
小楊 / 2019-12-03 09:00:51
一、操作步驟
原理：檢樣經(jīng)過(guò) 80 ℃殺菌后，添加嗜熱鏈球菌菌液。培養(yǎng)一段時(shí)間后，嗜熱鏈球菌開(kāi)始增殖。這時(shí)候加入代謝底物 TTC，若該樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測(cè)限，嗜熱鏈球菌將繼續(xù)增殖，還原 TTC 成為紅色物質(zhì)。相反，如果樣品中含有高于檢測(cè)限的抑菌劑，則嗜熱鏈球菌受到抑制，因此指示劑 TTC 不還原，保持原色。
二、檢驗(yàn)程序
⒈活化菌種：取一接種環(huán)嗜熱鏈球菌菌種，接種在 9 mL 滅菌脫脂乳中，36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 12 h～15h 后，置 2 ℃～5 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｃ?5 d 轉(zhuǎn)種一次。
⒉測(cè)試菌液：將經(jīng)過(guò)活化的嗜熱鏈球菌菌種接種滅菌脫脂乳，36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 15 h±1 h，加入相同體積的滅菌脫脂乳混勻稀釋成為測(cè)試菌液。
⒊培養(yǎng)操作：取檢樣 9 mL，置 18 mm×180 mm 試管內(nèi)，每份檢樣另外做一份平行樣。同時(shí)再作陰性和陽(yáng)性對(duì)照各一份，陽(yáng)性對(duì)照管用 9 mL 青霉素 G 參照溶液，陰性對(duì)照管用滅菌脫脂乳 9 mL。所有裝有樣品的試管置 80 ℃水浴加熱 5 min，冷卻至 37 ℃以下，加入測(cè)試菌液1 mL，輕輕旋轉(zhuǎn)試管混勻。36 ℃±1 ℃水浴培養(yǎng) 2 h，加 4％TTC 水溶液 0.3 mL，在旋渦混勻器上混合 15 s 或振動(dòng)試管保證液體與樣品混勻。36 ℃±1 ℃水浴避光培養(yǎng) 30 min，觀察顏色變化。如果顏色沒(méi)有變化，于水浴中繼續(xù)避光培養(yǎng) 30 min 作最終觀察。觀察時(shí)要迅速，避免光照過(guò)久出現(xiàn)干擾。
⒋判斷方法：在白色背景前觀察，檢樣呈乳的原色時(shí)，指示乳中有抗生素存在，為陽(yáng)性結(jié)果。檢樣呈紅色為陰性結(jié)果。如最終觀察現(xiàn)象仍為可疑，建議重新檢測(cè)。
三、報(bào)告
最終觀察時(shí)，檢樣變?yōu)榧t色，報(bào)告為抗生素殘留陰性。檢樣依然呈乳的原色，報(bào)告為抗生素殘留陽(yáng)性。
本方法檢測(cè)幾種常見(jiàn)抗生素的最低檢出限為：青霉素0.004 IU，鏈霉素 0.5 IU，慶大霉素 0.4 IU，卡那霉素 5 IU。
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