小鼠表皮黑色素細(xì)胞提取物的應(yīng)用！
小楊 / 2019-11-16 09:09:25
一、背景
小鼠表皮黑色素細(xì)胞提取物是從小鼠原代表皮黑色素細(xì)胞提取的，小鼠原代表皮黑色素細(xì)胞從正常小鼠皮膚組織制備。小鼠表皮黑色素細(xì)胞提取物可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。小鼠表皮黑色素細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。
二、生理結(jié)構(gòu)
表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。黑色素細(xì)胞是皮膚產(chǎn)生和維持色素的主要細(xì)胞，起源于神經(jīng)嵴，后逐漸遷移到表皮和毛囊。黑色素細(xì)胞的異?；蚬δ艿氖С?dǎo)致了一系列難治性色素性疾病的發(fā)生，如白癜風(fēng)、黃褐斑等。表皮黑色素細(xì)胞主要分布于位于表皮的基底層，與表皮細(xì)胞共同組成表皮黑素單位，其主要功能是產(chǎn)生黑素小體保護(hù)皮膚免受損害。黑色素細(xì)胞是一種皮膚里的特殊的細(xì)胞，它產(chǎn)生黑色素，傳遞給周?chē)慕琴|(zhì)形成細(xì)胞。黑色素停留在這些角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞核上起保護(hù)作用，防止染色體受到光線輻射受損。黑色素細(xì)胞能合成并分泌黑色素，因此是一種腺細(xì)胞。
然而黑色素的生物合成非常復(fù)雜，是通過(guò)色體（未成熟的黑色素）內(nèi)酪氨酸—酪氨酸酶反應(yīng)形成的。在正常人體表皮中，一個(gè)黑色素細(xì)胞大約可以顧及40個(gè)角質(zhì)形成細(xì)胞，稱為表皮的黑色素形成單位。皮膚的顏色來(lái)自于角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)存儲(chǔ)的黑色素。一般來(lái)講，存儲(chǔ)黑色素多的人膚色更深，也更受到保護(hù)，遠(yuǎn)離陽(yáng)光輻射。醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),黑色素細(xì)胞損傷,會(huì)導(dǎo)致黑色素生成不足,從而引發(fā)白癜風(fēng).主要原理是：黑色素細(xì)胞損傷、脫失后，被損傷的黑色素細(xì)胞可再釋放抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的抗黑色素細(xì)胞抗體，使更多的黑色素細(xì)胞被破壞，因而形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致大量的黑色素細(xì)胞失活，從而在皮膚表面形成形態(tài)各異，大小不一的斑點(diǎn)，也就是白癜風(fēng)。黑色素細(xì)胞的研究有利于理解和掌握產(chǎn)生黑色素機(jī)制和它的調(diào)節(jié)，在美容和化妝品領(lǐng)域可以制造新的美白產(chǎn)品，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域可以治療白化病，白癜風(fēng)，黑毒腫等疾病等。
三、應(yīng)用
小鼠表皮黑色素細(xì)胞提取物用于黑色素細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合構(gòu)建組織工程皮膚的初步研究皮膚缺損創(chuàng)面修復(fù)是整形外科臨床常見(jiàn)問(wèn)題之一。目前廣泛采用自/異體皮膚移植修復(fù)皮膚創(chuàng)面缺損,但是這種方法存在著皮膚來(lái)源受限、對(duì)機(jī)體產(chǎn)生二次創(chuàng)傷等缺陷。組織工程皮膚的研發(fā)和應(yīng)用為皮膚缺損修復(fù)提供了新的治療策略。目前已有組織工程化的真皮和全層皮膚等產(chǎn)品上市,然而這些“人工皮膚”目前僅發(fā)揮遮蓋創(chuàng)面和加速愈合的功能,尚不是真正意義上的具有色澤、排汗、生發(fā)等生物學(xué)功能的正?！捌つw”組織,因而構(gòu)建具有正常生物學(xué)功能的組織工程皮膚是該領(lǐng)域今后需重點(diǎn)關(guān)注的研究課題。皮膚中的黑色素細(xì)胞對(duì)于皮膚色澤的調(diào)節(jié)以及防止紫外線照射引起的細(xì)胞損傷起著重要的作用。以骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）為種子細(xì)胞構(gòu)建組織工程全層皮膚的研究基礎(chǔ)上,將黑色素細(xì)胞與BMSCs以適合的比例混合培養(yǎng),并利用Ⅰ型膠原膜為支架材料構(gòu)建含有色素細(xì)胞的組織工程皮膚,為研發(fā)具有色素功能的組織工程皮膚提供理論依據(jù)。
四、研究方法
1、以包皮組織作為細(xì)胞來(lái)源,用消化法獲得表皮細(xì)胞懸液,通過(guò)黑色素細(xì)胞完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)篩選,并通過(guò)低濃度胰酶消化法進(jìn)行傳代培養(yǎng),然后對(duì)其進(jìn)行DOPA染色、免疫組化檢測(cè)（S-100蛋白）和透射電鏡觀察,以及生長(zhǎng)曲線的檢測(cè);同時(shí)進(jìn)行BMSCs的分離培養(yǎng),對(duì)其表面抗原及其多向分化潛能進(jìn)行鑒定。
2、構(gòu)建Ⅰ型膠原膜,篩選適合混合培養(yǎng)黑色素細(xì)胞和BMSCs的培養(yǎng)基,確定該兩種細(xì)胞與Ⅰ型膠原膜復(fù)合構(gòu)建含有黑色素細(xì)胞的組織工程皮膚的方案,并通過(guò)免疫組化檢測(cè)（S-100蛋白）和掃描電鏡檢測(cè)構(gòu)建的組織工程皮膚生物學(xué)性狀。
3、建立裸鼠背部皮膚缺損動(dòng)物模型,將體外構(gòu)建的含有色素細(xì)胞的組織工程皮膚移植到裸鼠背部缺損創(chuàng)面,在術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)獲取標(biāo)本,通過(guò)大體標(biāo)本觀察、DAPI體內(nèi)示蹤標(biāo)記、HE染色、免疫組化檢測(cè)（S-100蛋白）及透射電鏡檢測(cè)等方法觀察組織工程皮膚修復(fù)皮膚創(chuàng)面缺損及生成色素情況。
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