一、通用名：牛布氏桿菌酶聯(lián)免疫分析試劑盒
二、使用目的：本試劑盒用于測定牛血清、血漿、或其它組織液中布氏桿菌的含量。
三、實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中牛布氏桿菌水平。用純化的布氏桿菌抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入布氏桿菌，再與HRP標記的布氏桿菌抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的布氏桿菌呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛布氏桿菌濃度。
四、試劑盒組成
⒈20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
⒉酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（270ng/L） 0.5ml×1瓶
⒊酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
⒋樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
⒌顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
⒍顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
五、標本要求
⒈標本采集后盡早進行實驗。血清、血漿可以直接檢測
⒉組織：按相關(guān)文獻提取后，取上清液待測
⒊不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
⒋可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。
六、操作步驟
⒈標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為（180 ng/L ，120 ng/L， 60 ng/L，30 ng/L， 15 ng/L）。
⒉加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
⒊溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
⒋配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
⒌洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
⒍加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
⒎溫育：操作同3。
⒏洗滌：操作同5。
⒐顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
⒑終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
⒒測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
七、計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
八、注意事項
⒈試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
⒉濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
⒊各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
⒋請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
⒌嚴格按說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
⒍底物請避光保存。
⒎封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
⒏所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
⒐本試劑不同批號組分不得混用。
⒑如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
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