銅綠假單胞菌的確證性試驗(yàn)！
小楊 / 2019-09-28 07:04:13
銅綠假單胞菌的確證性試驗(yàn)
⒈營養(yǎng)瓊脂
盡可能將所有經(jīng)濾膜過濾后，在36℃±1℃培養(yǎng)了20h～24h，將需驗(yàn)證的可疑菌落劃線接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，于36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h。檢查再次純化的菌落，并將最初顯紅褐色的菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。
⒉氧化酶試驗(yàn)
取2 滴～3 滴新鮮配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。用鉑金絲接種環(huán)或玻璃棒，將適量的純種培養(yǎng)物涂布在預(yù)備好的濾紙上。在10s 內(nèi)顯深藍(lán)紫色的視為陽性反應(yīng)。也可以按照商品化氧化酶測試產(chǎn)品的說明書進(jìn)行該項(xiàng)測試。
⒊金氏B（King′s B）培養(yǎng)基
將上述呈紅褐色的且氧化酶反應(yīng)呈陽性的培養(yǎng)物接種于金氏B 培養(yǎng)基上，于36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)1d～5d。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產(chǎn)生熒光性，將5d 內(nèi)產(chǎn)生熒光的菌落記錄為陽性。
⒋乙酰胺肉湯
將5.4.1 中的純培養(yǎng)物接種到裝有乙酰胺肉湯的試管中，在36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h。然后向每支試管培養(yǎng)物加入1 滴～2 滴鈉氏試劑，檢查各試管的產(chǎn)氨情況，如表現(xiàn)出從深黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽性結(jié)果，否則為陰性。
⒌計(jì)數(shù)
將產(chǎn)生綠膿色（藍(lán)色/綠色）或氧化酶反應(yīng)呈陽性，在紫外燈下產(chǎn)生熒光，且在乙酰胺肉湯中產(chǎn)氨的所有菌落證實(shí)為銅綠假單胞菌，并進(jìn)行計(jì)數(shù)。
通過計(jì)數(shù)培養(yǎng)后的濾膜上的菌落以獲得銅綠假單胞菌的數(shù)量。其他產(chǎn)生熒光或者呈紅棕色的菌落需要進(jìn)一步驗(yàn)證。
注：最初濾膜上顯熒光的菌落經(jīng)氧化酶反應(yīng)均呈陽性，因此不需在這個(gè)測試中計(jì)數(shù)
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