哺乳動物細胞培養(yǎng)過程 及培養(yǎng)條件!
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-05-27 11:33:02
哺乳動物細胞培養(yǎng)過程
經(jīng)過原代細胞培養(yǎng)，細胞分裂繁殖，培養(yǎng)物逐漸增多長滿培養(yǎng)空間，繼而相互之間接觸，發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，生長速度逐漸減慢甚至停止。需要重新接種到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)進行傳（繼）代培養(yǎng)。
哺乳動物細胞在培養(yǎng)過程中會經(jīng)過組織提取，原代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)等過程。傳代培養(yǎng)會根據(jù)具體情況分為細胞株培養(yǎng)和細胞系培養(yǎng)。如下對各個過程進行簡述：
原代培養(yǎng)：從動物機體取出組織后切碎，經(jīng)過各種酶（常用胰蛋白酶），螯合劑（常用EDTA）結合機械方法（吸液管反復吸吹）處理，分散成單細胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。一般把從動物有機體內(nèi)取出細胞開始培養(yǎng)，到繁殖十代以內(nèi)的細胞培養(yǎng)稱為原代細胞培養(yǎng)。
傳（繼）代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳（繼）代培養(yǎng)。
細胞系：初代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細胞，即稱之為細胞系。如果細胞系的生存期有限，則稱為有限細胞系。已獲得無限繁殖能力，能持續(xù)生存的細胞系稱為連續(xù)細胞系或無限細胞系。
細胞株：從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系，用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增值形成的細胞群，稱為細胞株。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原珠形狀不同的細胞群，成為亞株。
哺乳動物細胞培養(yǎng)條件
不同哺乳動物細胞在各個階段的培養(yǎng)，都需要有基礎的培養(yǎng)條件，歸納如下：
1、無菌無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細胞造成危害。
2、營養(yǎng)：液體合成培養(yǎng)基包含糖、氨基酸、促生長因子、水、無機鹽、微量元素等；通常還需加入血漿、血清等天然成分
3、適宜的溫度和pH：人和哺乳動物細胞最適宜溫度大多為36±0.5℃。適宜的酸堿度為pH 7.2-7.4。
4、氣體環(huán)境：氣體環(huán)境一般為“95% 空氣+5% CO2”混合氣體。氧氣是細胞代謝必須氣體，CO2維持培養(yǎng)液pH。