什么是質粒?
質粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區(qū)DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子(即細胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質粒雖然都是環(huán)狀構型,它存在于許多細菌以及酵母菌等生物(多為原核生物)中,乃至于植物的線粒體等胞器中。
什么是載體?
載體即要把一個有用的基因(目的基因——研究或應用基因)通過基因工程手段送到生物細胞(受體細胞),需要運載工具(交通工具)攜帶外源基因進入受體細胞,這種運載工具就叫做載體(vector)。細菌或病毒質粒是重組DNA技術中常用的載體。
⒈載體的分類
按功能分成:
(1)克隆載體都有一個松弛的復制子,能帶動外源基因,在宿主細胞中復制擴增。它是用來克隆和擴增DNA片段(基因)的載體。
(2)表達載體具有克隆載體的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)還具有轉錄/翻譯所必需的DNA順序的載體。
按進入受體細胞類型分:
(1)原核載體
(2)真核載體
(3)穿梭載體(sbuttlevector)
⒉載體的特點
(1)都能獨立自主的復制:載體DNA分子中有一段不影響它們擴增的非必需區(qū)域,如MCS,插在其中的外源DNA片段,能被動的跟著載體一起復制/擴增,就像載體的正常成分一樣。
(2)都能便利的加以檢測:如載體的藥物抗性基因,多是抗生素抗性基因,將受體細胞放在含有該抗生素培養(yǎng)板上培養(yǎng)生長時,只有攜帶這些抗性基因的載體分子的受體細胞才能存活。
(3)都能容易進入宿主細胞中去,也易從宿主細胞中分離純化出來。
質??梢哉f是一個統(tǒng)稱,載體是質粒改造過用來運載的工具??!
⒊選用質粒做載體的要求
以最常用的為例
(1)選分子量小的質粒,即小載體(1-1.5kb)→不易損壞,在細菌里面拷貝數也多(也有大載體);
(2)一般使用松弛型質粒在細菌里擴增不受約束,一般10個以上的拷貝,而嚴謹型質粒<10個。
(3)必需具備一個以上的酶切位點,有選擇的余地;
(4)必需有易檢測的標記,多是抗生素的抗性基因,不特指多位Ampr。
無論選用哪種載體,首先都要獲得載體分子,然后采用適當的限制酶將載體DNA進行切割,獲得分子,以便于與目的基因片段進行連接。
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