一、細胞
多能性胚胎干細胞產(chǎn)生于小鼠胚泡
1．表達綠色熒光蛋白（EGFP）的B5-ES細胞。由Dr. Nagy的實驗室制備。
2．D3-ATCC; CRL-1934. 我們得到時大約傳了17代。
3．J1-由Dr. Jaenish的實驗室友情提供。我們得到時大約傳了7－9代。
4．J1rtTA-rtTA表達J1細胞，由Dr. Jaenish的實驗室友情提供。
5．表達黃色熒光蛋白的YC5-ES細胞，由Dr. Nagy的實驗室提供。
二、一般培養(yǎng)——維持ES細胞處于未分化狀態(tài)
ES細胞培養(yǎng)用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培養(yǎng)基來阻止細胞的分化。為細胞提供包被有0.1％明膠的平板作為粘附細胞的基質(zhì)。建議每2－3天從達到 80％－90％融合的平板按1：8的比率傳代細胞一次，細胞傳代以后，在將細胞接種在0.1％明膠包被的培養(yǎng)皿之前，通過預(yù)先將細胞接種在沒有經(jīng)過包被的組織培養(yǎng)板2個小時，使分化細胞粘附，從而將分化和未分化細胞分開。將細胞全程置于37℃，5％CO2，100％濕度條件下培養(yǎng)。
培養(yǎng)基
ES：配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（該溶液也能用于EB培養(yǎng)基--見下文）。分裝在50ml FALCON管中，（稀釋為2×，每管42ml），貯存在-20℃。通過將21ml該溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制備培養(yǎng)基，0.2μm濾膜過濾。貯存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。
貯存液
DMEM(高糖)
馬血清（HS）
L-谷氨酰胺（200mM）
MEM NEAA（10mM）
HEPES（1M）
β-巰基乙醇（55Mm）
PEST
ESGRO
復(fù)蘇細胞
細胞被凍存在10％二甲基亞砜（DMSO）中防止結(jié)晶的形成，結(jié)晶的形成會損害細胞。然而，二甲基亞砜對細胞有毒性，快速的進行細胞復(fù)蘇是很重要的。
步驟
1．從液氮中取出一管細胞；
2．將凍存管置于37℃水浴中2分鐘（或放到管內(nèi)溶液恰好完全溶解）；
3．將細胞轉(zhuǎn)移到一15ml Falcon管中；
4．加入5ml ES培養(yǎng)基（用培養(yǎng)基沖洗凍存管）；
5．離心3分鐘；
6．棄上清，用2ml ES培養(yǎng)基重懸細胞，至少吹打10次；
7．接種在明膠包被（見下文）的6孔或6cm組織培養(yǎng)皿；
8．孵育。
中國微生物菌種查詢網(wǎng)隸屬于北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家專業(yè)提供中國微生物菌種，標準菌種，質(zhì)控菌株,ATCC菌種,細胞系以及培養(yǎng)基等產(chǎn)品的查詢網(wǎng)站！自成立至今，已提供各類微生物菌種、細胞、培養(yǎng)基數(shù)量達四萬余份，接待咨詢客戶數(shù)量5萬余人次，成交合同數(shù)量2萬余份！是國內(nèi)微生物菌種及細胞信息最全的網(wǎng)站！ 我們擁有自主研發(fā)能力，提供的ATCC菌種達15000余份,ATCC各類細胞系達3000余份,保藏中心涵蓋菌種資源更達數(shù)十萬余份！