大多數(shù)細菌均可以通過人工方法培養(yǎng)，而衣原體和病毒的分離培養(yǎng)往往需要活組織、雞胚、特殊細胞株及動物接種。只有將微生物培養(yǎng)出來才能對它進行研究、鑒定和應用。
一、接種與分離方法
根據(jù)待檢標本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。
1．平板劃線分離培養(yǎng)法
對混有多種細菌的臨床標本，采用劃線分離和培養(yǎng)，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。臨床送檢的標本如痰、咽試子、泌尿生殖道的分泌物和糞便等細菌檢驗均需要借助瓊脂平板劃線分離目的菌。平板劃線分離法通常有兩種方法：
（1）分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的標本如痰、泌尿生殖道的分泌物和糞便或混合細菌的分離。先用接種環(huán)挑取標本涂布于瓊脂平板1區(qū)（占培養(yǎng)基總面積的?）并作數(shù)條劃線，再于2、3、4區(qū)依次劃線。每劃完一個區(qū)域，均將接種環(huán)燒灼滅菌1次，冷后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均與上一區(qū)域的劃線交接1~3次。一個成功分區(qū)劃線的平板，培養(yǎng)后分別觀察1區(qū)形成菌苔，2區(qū)菌落連成線，3區(qū)和4區(qū)可分離到單個菌落。
（2）連續(xù)劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標本或培養(yǎng)物中的細菌分離培養(yǎng)。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹，然后再用接種環(huán)或拭子在平板表面曲線連續(xù)劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。
瓊脂斜面接種法
主要用于菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環(huán)（針）挑取單個菌落或培養(yǎng)物，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后再從底部沿直線向上曲折連續(xù)劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養(yǎng)基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。
3．穿刺接種法
此法多用于半固體培養(yǎng)基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種，半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落，由培養(yǎng)基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養(yǎng)基，穿刺高層部分，退出接種針后直接劃線接種斜面部分。
4．液體培養(yǎng)基接種法
用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。用接種環(huán)挑取單個菌落，傾斜液體培養(yǎng)管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準）。此接種法應避免接種環(huán)與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室污染。
5．傾注平板法
本法主要用于飲水、飲料、牛乳和尿液等標本中的細菌計數(shù)。取純培養(yǎng)物的稀釋或原標本1ml至無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基15~20ml傾注入該無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，混勻，待凝固后置37℃培養(yǎng)，長出菌落后進行菌落計數(shù)，以求出每毫升標本中所含菌數(shù)。先數(shù)6個方格（每格為1cm2）中菌落數(shù)，求出每格的平均菌落數(shù)，并算出平皿直徑，然后按下列公式計數(shù)，求出每毫升標本中的細菌數(shù)。
全平板菌落數(shù)=每方格的平均菌落數(shù)×лr2
每ml標本中的細菌數(shù)=全平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)
6．涂布接種法
本法多用于紙片擴散法藥敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養(yǎng)基表面，然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復涂布，使被接種液均勻分布于瓊脂表面，然后貼上藥敏紙片，或直接培養(yǎng)，本法經(jīng)培養(yǎng)后細菌形成菌苔。
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