細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)效率的檢測(cè)方法有哪些？
微生物查詢網(wǎng) / 2019-05-05 14:43:34
一、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。Real-time PCR是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，通過(guò)熒光信號(hào)，對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。但是，熒光定量PCR所檢測(cè)的是轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中待測(cè)基因的mRNA的表達(dá)水平，對(duì)于目的基因的蛋白表達(dá)水平不能夠檢測(cè)；
二、Wester Blot檢測(cè)
Western Blot又稱蛋白質(zhì)免疫印跡（免疫印跡實(shí)驗(yàn)），其基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或者生物組織樣品進(jìn)行著色，并通過(guò)分析著色的位置和著色的深度獲得特定蛋白在所分析的細(xì)胞或者組織中表達(dá)情況的信息。Western Blot所檢測(cè)的是組織或者細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
三、流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是一種在功能水平上對(duì)細(xì)胞或者其他生物粒子進(jìn)行定量檢測(cè)和分析的檢測(cè)手段，它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中檢測(cè)得到多個(gè)參數(shù)，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比具有更加快速、準(zhǔn)確以及定量等特點(diǎn)。使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率可以更加精確的確定轉(zhuǎn)染的效率，對(duì)轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行量化。
四、熒光顯微鏡觀察
當(dāng)我們轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA含有熒光蛋白基因是，可以通過(guò)熒光顯微鏡觀察的方法來(lái)確定轉(zhuǎn)染的效率，在熒光顯微鏡下，可以觀察到熒光的強(qiáng)弱以及熒光的效率。
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