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研究細(xì)胞凋亡,你得“對癥下藥”!
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-04-18 09:10:53

        細(xì)胞凋亡是為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,受生理或病理一些因素的影響,細(xì)胞遵循的一種有序的程序性死亡。細(xì)胞發(fā)生凋亡,首先細(xì)胞體積縮小,連接消失,然后細(xì)胞質(zhì)密度增加,線粒體膜電位消失,通透性改變,釋放細(xì)胞色素C到胞漿,核質(zhì)濃縮,核膜核仁破碎,DNA降解成為片段,最終形成凋亡小體,被巨噬細(xì)胞吞噬。

細(xì)胞凋亡

      細(xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程,此間涉及一系列復(fù)雜的生化反應(yīng),多個(gè)基因的表達(dá)調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo),多種酶參與的級聯(lián)反應(yīng)和多種信號通路。細(xì)胞感受到相應(yīng)的凋亡信號刺激,胞內(nèi)一系列控制開關(guān)的開啟或關(guān)閉,多種酶的活化,引發(fā)一系列級聯(lián)反應(yīng)。不同的外界因素啟動(dòng)凋亡的方式不同,所引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)也不相同。
What’s早期凋亡?What happened to早期凋亡?
特征一:脂膜內(nèi)側(cè)外翻
      在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),細(xì)胞發(fā)生凋亡早期, PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35-36kD鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與PS有高度親和力,它通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V是檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。通常,使用一些熒光探針標(biāo)記Annexin V,就可以簡單直接地檢測到PS外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。

熒光探針

檢測工具:
特質(zhì):
      Abbkine專利AbFlourTM系列特色熒光染料(藍(lán)色、綠色、紅色)標(biāo)記重組人Annexin V蛋白,與PI搭配,推出不同熒光凋亡檢測試劑盒,適用于用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡等熒光設(shè)備的檢測。
特征二:線粒體膜電位下降
       正常線粒體膜電位是維持線粒體進(jìn)行氧化磷酸化、產(chǎn)生ATP的前提,是維持線粒體功能所必需,線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件,JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位的理想熒光探針,線粒體膜電位較高時(shí),JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物(J-aggregates),可以產(chǎn)生紅色熒光(Ex/Em = 585/590),線粒體膜電位較低時(shí),JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時(shí)JC-1為單體(monomer),可以產(chǎn)生綠色熒光(Ex/Em = 510/527 nm)。 
檢測工具:
特質(zhì):
       Abbkine線粒體膜電位分析試劑盒(JC-1),以JC-1 為熒光探針,快速靈敏地檢測線粒體膜電位的變化,此試劑盒可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。

線粒體膜電位分析試劑盒


What’s晚期凋亡?What happened to晚期凋亡?
      細(xì)胞凋亡中, 尤其凋亡晚期,染色體DNA會發(fā)生斷裂,產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧尿苷三磷酸核苷酸(dUTP)和熒光素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端,即脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)。正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂,很少能夠被染色。由此,TUNEL是檢測細(xì)胞凋亡后期DNA片段化的最常用方法。

染色體DNA

檢測工具: 
特質(zhì):
       Abbkine的TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒提供實(shí)驗(yàn)所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案,適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀等多種儀器,可用于檢測貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞,石蠟包埋組織切片,冰凍切片等多種樣品類型。
細(xì)胞凋亡一旦開始便無法停止,它是一個(gè)高度調(diào)控的過程。 
      細(xì)胞凋亡可通過兩種起始途徑啟動(dòng),內(nèi)始式途徑由非受體刺激激活,如DNA損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、代謝應(yīng)激,線粒體外膜通透性改變,如細(xì)胞色素c釋放,外源途徑通過死亡受體與配體結(jié)合(如FasL,腫瘤壞死因子TNF)開始。
        此后,這兩種途徑都匯合于caspase級聯(lián)反應(yīng),通過激活caspase蛋白酶或降解蛋白質(zhì)的酶來誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。抗凋亡配體,如細(xì)胞因子,生長因子,通過不同的信號分子如AKT和p90RSK和抗凋亡蛋白,如Bcl-2和Bcl-x促進(jìn)細(xì)胞的存活、增殖和分化。這些細(xì)胞因子和生長因子的退出導(dǎo)致細(xì)胞死亡。


細(xì)胞凋亡

檢測工具:

特質(zhì):
Abbkine精選細(xì)胞凋亡系列皇冠抗體,經(jīng)過多重嚴(yán)格驗(yàn)證,適用于多種細(xì)胞應(yīng)用,滿足大多數(shù)客戶的研究需求,優(yōu)異的結(jié)果如下: 
【1】 大鼠肺組織免疫熒光分析,使用Caspase-3多克隆抗體,1:200稀釋。

多克隆抗體

【2】石蠟包埋人子宮組織的免疫組化分析,使用Bad多克隆抗體,1:200稀釋。

Bad多克隆抗體

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