細(xì)胞轉(zhuǎn)染是否可以加血清？
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-04-18 08:57:18
傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑有一定的細(xì)胞毒性，在轉(zhuǎn)染過程由于提高細(xì)胞的通透性因而不能在培養(yǎng)基中添加抗生素。如，陽離子脂質(zhì)體。帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)染過程中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽離子脂質(zhì)體對核酸的吸附，影響轉(zhuǎn)染效率。另外，使用脂質(zhì)體等轉(zhuǎn)染試劑時，由于含血清轉(zhuǎn)染會將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，故不能有血清轉(zhuǎn)染。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基，這其實是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性。
轉(zhuǎn)染后在6小時左右最好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細(xì)胞死亡?？蓪崟r觀察1/5細(xì)胞變圓的時候加入血清。
現(xiàn)在市面上也有一些改進(jìn)了的轉(zhuǎn)染試劑，可以在轉(zhuǎn)染時含有血清；也有一些公司完全改變了產(chǎn)品性質(zhì)，使轉(zhuǎn)染過程更加簡便，效率更高。如，英格恩公司的EntransterTM只濃縮包裹核酸不會將血清帶入細(xì)胞。EntransterTM采用有血清轉(zhuǎn)染，不用在有血清和無血清之間更換，增加工作量，同時有血清轉(zhuǎn)染不僅不造成細(xì)胞毒性，而且由于血清的存在，有利于細(xì)胞的狀態(tài)維護(hù)，提高轉(zhuǎn)染效率。
由于EntransterTM的內(nèi)毒素和細(xì)胞毒性都非常之低，加上轉(zhuǎn)染復(fù)合物能夠高效的在完全培養(yǎng)基中形成，因而整個轉(zhuǎn)染過程可以在含血清而且是含有抗生素的培養(yǎng)基中操作，無需更換培養(yǎng)基，這極大的方便轉(zhuǎn)染操作！適用于包括干細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代細(xì)胞和其他方法難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的轉(zhuǎn)染在內(nèi)的多種真核細(xì)胞。
細(xì)胞毒性的大小往往意味著對細(xì)胞生理活動影響的大小。這會對相關(guān)研究數(shù)據(jù)產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾，甚至影響研究的結(jié)論。因此，選擇一種高效方便的轉(zhuǎn)染試劑是細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功的關(guān)鍵。