菌種保藏：甘油冷凍保藏法本方法適合于中、長期菌種保藏，保藏時(shí)間一般為2-4年左右。
（1）用火焰滅菌的接種環(huán)取斜面菌種在平皿上劃線分離單菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24-48小時(shí)，至單菌落的大小為3mm左右。
（3）挑取一個(gè)單菌落，接種于一個(gè)裝50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振蕩培養(yǎng)10-15小時(shí)，至菌密度OD600為1.0-1.5。
（4）用火焰滅菌的接種環(huán)取少量種子液，涂片后，作革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體的形態(tài)，及是否有雜菌。（5）按30%甘油：種子液為1：1（V/V）的量加入無菌甘油，混合后分裝至事先滅菌的菌種保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
甘油保存菌種方法的改良摘要:
目的：將甘油原液保存菌種方法進(jìn)行改良，尋找一種簡(jiǎn)便易行的保存實(shí)驗(yàn)室各種菌種的方法。
方法：將一般細(xì)菌的菌種純化后接種于普通肉湯管，4～6h增菌后，加入適量甘油一生理鹽水保存液，-20℃冰箱保存；鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌株純化后接種于血清肉湯管，在5％～10％CO2中經(jīng)8～10h增菌后，加入適量保存液，80℃低溫冰箱保存；真菌菌種純化后直接取菌洗入肉湯，不做培養(yǎng)，加入保存液后，-20℃冰箱保存。結(jié)果在連續(xù)3年實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，各菌種保存效果良好，且其形態(tài)結(jié)構(gòu)、染色特性、生化反應(yīng)等與標(biāo)準(zhǔn)株相符。結(jié)論使用甘油生理鹽水保存法來保存菌種，各菌種保存時(shí)間長，方法簡(jiǎn)便，特別是使鏈球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般實(shí)驗(yàn)室得以保存。菌種的甘油冷凍保存法摘要:以體積分?jǐn)?shù)為０．８的甘油生理直國水為保存液，在－２０℃保存軍團(tuán)菌、葡萄球菌等３５個(gè)菌株，觀察９年，效果良好。
醫(yī)學(xué)微生物教學(xué)用菌種保存方法的比較摘要:
目的：尋求一種簡(jiǎn)便實(shí)用的有效保存各種教學(xué)用菌種的方法。
方法：將各待保存的菌種純化后用取菌環(huán)直接從平板上刮取，置于盛有0.5ml各保存液的菌種瓶中，甘油原液-20℃保存，石蠟油和兔防凝血4℃保存。結(jié)果在連續(xù)52個(gè)月的實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，甘油保存的各菌種效果較好，且各菌生化反應(yīng)、形態(tài)結(jié)構(gòu)、染色特性等與標(biāo)準(zhǔn)株相符。結(jié)論甘油保存法操作簡(jiǎn)便，保存時(shí)間長，適用于微生物教學(xué)用各菌種的保存。甘油保存菌種方法的改良.pdf菌種的甘油冷凍保存法.pdf醫(yī)學(xué)微生物教學(xué)用菌種保存方法的比較.用甘油保存過細(xì)菌，酵母，霉菌和放線菌，40%-50%的甘油是它的最終濃度。甘油濃度過低低溫保存易結(jié)冰，使菌死亡。我同學(xué)有直接將菌液-20保存的，不加任何保護(hù)劑，但保存的時(shí)間很短，他們保存過一年的，但很多有死掉的。我們做大腸桿菌感受態(tài)，最終甘油是15%的濃度，有時(shí)結(jié)冰也會(huì)使菌死掉。我用40%-50%的甘油最終濃度一直很好，也不結(jié)冰。甘油一般是用那種藍(lán)蓋的小管（1毫升）滅菌，放0.7毫升左右的甘油，然后加菌懸液0.1至0.2毫升即可。甘油菌種比列為7：1.