由于產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）廣泛存在于自然界中，且其毒素也可能存在于免疫過(guò)的或有自然抵抗力動(dòng)物的腸道中。因此，在臨床上即使從腸道中檢測(cè)到產(chǎn)氣莢膜梭索菌的毒素，依然不能確定是產(chǎn)氣莢膜梭菌病。產(chǎn)氣莢膜梭菌病根據(jù)該病的流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床及病理變化特征可做出初步診斷，確診則要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。
一、臨床實(shí)驗(yàn)室診斷
產(chǎn)氣莢膜梭菌病的正確確診需根據(jù)以下幾個(gè)方面：
1、小腸內(nèi)檢測(cè)出大量毒素；
2、腸道內(nèi)有大量產(chǎn)氣莢膜梭菌；
3、腎臟、肝臟等實(shí)質(zhì)器官發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌和其毒素；
4、尿液含有葡萄糖。
二、產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素檢測(cè)
產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素檢測(cè)的經(jīng)典方法有：
1、動(dòng)物致死性試驗(yàn)：將腸道內(nèi)容物稀釋取上清攻毒小白鼠，觀察小白鼠致死情況；
2、毒素中和試驗(yàn)法：是更佳準(zhǔn)確的方法，提取的毒素與毒素抗體中和后攻毒小白鼠，若對(duì)照組死亡，中和組不死亡，則精確表明某型毒素致死；
3、卵磷脂水解試驗(yàn)法：α毒素能分解卵磷脂，產(chǎn)氣莢膜梭菌所有型均能產(chǎn)生α毒素，能驗(yàn)證產(chǎn)氣莢膜梭菌的存在。
這些較為常用的方法中，以毒素中和試驗(yàn)最為特異，但相對(duì)而言這些方法均較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且敏感性較低。
三、分子生物學(xué)診斷方法
隨著生物科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，一些分子水平上的檢測(cè)方法在毒素檢測(cè)上得到了普遍應(yīng)用。Kadra等為了驗(yàn)證PCR的準(zhǔn)確可靠性，用PCR方法對(duì)不同來(lái)源的產(chǎn)氣莢膜梭菌及毒素進(jìn)行分型驗(yàn)證，將90株產(chǎn)氣莢膜梭菌用細(xì)菌生化試驗(yàn)等方法進(jìn)行驗(yàn)證，然后用小鼠血清中和試驗(yàn)進(jìn)行定型，再用PCR法擴(kuò)增α、β和ε三種毒素基因片段，最后將兩種定型方法鑒定的血清型進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，兩種方法定型一致。表明PCR法準(zhǔn)確可靠，且比小鼠的血清中和試驗(yàn)節(jié)約成本，方便可靠。于曉霞等為了尋找一種快速、準(zhǔn)確的方法檢測(cè)產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素型，采用SDS-PAGE的方法，對(duì)不同的產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株所產(chǎn)的外毒素蛋白進(jìn)行分子量測(cè)定，從而確定所產(chǎn)外毒素的種類，確定菌株型。Fach等首先研究了用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法檢測(cè)毒素，參考毒素其他桿菌的磷脂酶C基因，設(shè)計(jì)了保守區(qū)域的針對(duì)基因特異性的引物，用PCR法擴(kuò)增除了基因片段與毒素基因內(nèi)的序列完全一致，表明可以使用PCR方法檢測(cè)毒素基因，從而驗(yàn)證細(xì)菌型。Warren等應(yīng)用PCR方法對(duì)包埋在福爾馬林里的含有產(chǎn)氣莢膜梭菌的病料進(jìn)行基因檢測(cè)，擴(kuò)增到了α、β和ε毒素基因，雖然產(chǎn)氣莢膜梭菌已經(jīng)死亡，但產(chǎn)氣莢膜梭菌基因依然沒(méi)有被破壞，因而PCR方法可以檢測(cè)死亡產(chǎn)氣莢膜梭菌的存在。
參考文獻(xiàn)：
1、Kadra B, Guillou JP, Popoff M, et al. Typing of sheep clinical isolates and identification of enterotoxigenic Clostridium perfringens strains by classical methods and by polymerase chain reaction (PCR). FEMS Immunology & Medical Microbiology, 1999, 24(3): 259-266.
2、Warren AL, Uzal FA, Blackall LL, et al. PCR detection of Clostridium perfringens type D in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of goats and sheep. Letters in applied microbiology, 1999, 29(1): 15-19.