制種注意事項(xiàng)
羊肚菌的菌種性能與其它食用菌不同，菌種分離方法和育種手段及栽培管理技術(shù)與其它食用菌也有很大差異。最大的缺點(diǎn)就是容易退化、變異、生霉。這對栽培羊肚菌帶來很大困難。對此，首先要控制菌種傳代，無論母種、原種、栽培種，若違反技術(shù)要求，多傳一代就會出現(xiàn)上述不良反應(yīng)或不長子實(shí)體。母種只能經(jīng)過原種栽培種，到栽培中的一次流程和3次破菌愈合才能保住質(zhì)量；若超過3次菌絲斷裂而重新萌發(fā)的新菌絲，會失去或降低酶的分解作用，以致抗病力差，易生雜菌，不出菇。
母種的制作
1、培養(yǎng)基配方
①、黃豆芽500克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，羊肚菌基腳～50克，水1升。
②、黃豆芽500克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，水1升。
③、櫟木屑500克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，水1升。
④、馬鈴薯200克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，水1升。
⑤、蛋白胨1克，葡萄糖20克，瓊脂20克，酵母膏1克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克，維生素B1，1克，水1升。pH值自然。
上述配方任選一組。將木屑或豆芽加水1升煮30分鐘，過濾取汁，并將余下的水補(bǔ)足1升，加入其它原料，煮至溶化后，按母種制作常規(guī)方法，分裝于18毫米×180毫米或20毫米×200毫米試管的1/5，塞上棉塞，使用高壓滅菌鍋徹底滅菌；在0.68千克壓力下維持60分鐘，自然冷卻至指針回到原位才可打開，放成斜面?zhèn)溆谩?br />
2、菌種分離
首先要具有食用菌專業(yè)基礎(chǔ)知識、多年的菌種分離經(jīng)驗(yàn)及菌絲鑒別能力，其次要購置母種培養(yǎng)基、無菌接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高倍顯微鏡等必要設(shè)備。根據(jù)當(dāng)?shù)匮蚨蔷L季節(jié)，趁羊肚菌生長旺盛時做菌種分離工作。
①、分離方法
羊肚菌的分離方法與其它食用菌大不相同。它需要一種助生菌與羊肚菌菌絲共生時才能出菇。這種助生菌長期活動在土壤中，有時以芽孢菌形式出現(xiàn)，有時以菌絲形式出現(xiàn)。它為羊肚菌的原基形成和子實(shí)體生長發(fā)育起著至關(guān)重要的作用。因此，從土壤中分離該菌比其它任何方式分離要好些。但從土壤分離難度太大，成功率不到萬分之一，并且難以分辨，所以只有采取羊肚菌基腳土分離，才能真正找到羊肚菌的出菇菌絲。初學(xué)者可在四川綿陽市食用菌研究所購買培養(yǎng)好的羊肚菌優(yōu)良母種，并參加現(xiàn)場培訓(xùn)。
②、操作過程
在羊肚菌生長的周圍，可見白色菌絲充滿土壤。從土壤中挑選這種菌絲容易成功。現(xiàn)介紹兩種土壤分離的簡易方法：一種是土壤直接分離，另一種是浸提分離。土壤直接分離法：在羊肚菌生長的地方去掉羊肚菌，取周圍5厘米以內(nèi)的土壤，去掉表層，把土壤放入無菌接種箱內(nèi)，然后放入試管培養(yǎng)基，進(jìn)行接種箱空間消毒。即按接種箱每立方米空間用甲醛10毫升，高錳酸鉀5克，混合產(chǎn)生氣體消毒，半小時后才可操作。將基腳土用接種針挑取黃豆大小一塊，迅速放到試管內(nèi)的空白培養(yǎng)基上，每管放一塊，塞上棉塞，接種后取出培養(yǎng)。浸提分離法：將基腳土用無菌水稀釋，澄清后用接種針蘸取少量溶液，滴到試管內(nèi)的空白培養(yǎng)基上，塞上棉塞后取出培養(yǎng)。
分離后，放在12～18℃溫度下培養(yǎng)觀察。3天后培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲，每天仔細(xì)檢查每支試管的發(fā)菌及變化情況。區(qū)分和認(rèn)識各類雜菌是最關(guān)鍵的核心技術(shù)。真正的羊肚菌菌絲最初為灰白色，生長很快，時間長會變成棕黃色，有時會出現(xiàn)菌核，母種7天長滿試管，原種、栽培種15天可長滿瓶底。是否分離成功，必須做栽培出菇試驗(yàn)，待出菇后才能準(zhǔn)確認(rèn)定是否羊肚菌的菌種。一旦菌種分離成功，在以后的轉(zhuǎn)接過程中要小心，不能再讓雜菌感染，必須把好高溫滅菌關(guān)和接種消毒關(guān)，才能保證菌種質(zhì)量和成活率。
3、轉(zhuǎn)接提純
待培養(yǎng)基表面余水干后才能使用，否則會被細(xì)菌感染。接種要求在接種箱內(nèi)通過藥物滅菌進(jìn)行，將第一代純母種挑取黃豆大一塊帶菌絲的培養(yǎng)基，放入空白培養(yǎng)基上，每支母種可接10～15支，母種只能擴(kuò)種一次，不能多接或多擴(kuò)，否則會影響子實(shí)體生長。