質(zhì)粒圖譜為質(zhì)粒DNA序列的物理圖譜，提供了包括質(zhì)粒的大小、篩選標記、克隆位點、轉(zhuǎn)錄及翻譯元件等信息，為我們選擇質(zhì)粒、了解質(zhì)粒特點及應(yīng)用提供了重要依據(jù)。對于初學(xué)者來說改如何去閱讀質(zhì)粒圖譜呢？今天來給大家講解一下如何閱讀質(zhì)粒圖譜，底部還有質(zhì)粒、酶切切點選擇的相關(guān)教學(xué)視頻。
質(zhì)粒的組成要素有哪些
復(fù)制起始位點：Ori 即控制復(fù)制起始的位點。原核生物 DNA 分子中只有一個復(fù)制起始點。而真核生物 DNA 分子有多個復(fù)制起始位點。
抗生素抗性基因：可以便于加以檢測，如 Amp+ ,Kan+。
多克隆位點MCS：克隆攜帶外源基因片段。
P/E 啟動子/增強子
Terms 終止信號
加poly（A）信號：可以起到穩(wěn)定 mRNA 作用
如何閱讀質(zhì)粒圖譜
第一步：首先看 Ori 的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）。
第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。
Ampr 水解 β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。
tetr 可以阻止四環(huán)素進入細胞。
camr 生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘?。
neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使 G418（長那霉素衍生物）失活。
hygr 使潮霉素 β 失活。
第三步：看多克隆位點（MCS）。
它具有多個限制酶的單一切點。便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導(dǎo)致某種標志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。
質(zhì)粒一般只能容納小于 10 Kb 的外源 DNA 片段。一般來說，外源 DNA 片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。
第五步：是否含有表達系統(tǒng)元件，即啟動子－核糖體結(jié)合位點－克隆位點－轉(zhuǎn)錄終止信號。
這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗?zāi)康臑闇世K。
啟動子－核糖體結(jié)合位點－克隆位點－轉(zhuǎn)錄終止信號
啟動子－促進 DNA 轉(zhuǎn)錄的 DNA 順序，這個 DNA 區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是 DNA 分子上可以與 RNApol 特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動子本身不被轉(zhuǎn)錄。
增強子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控順序。其作用與增強子所在的位置或方向無關(guān)。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。/沉默子－負增強子，負調(diào)控序列。
核糖體結(jié)合位點/起始密碼/ SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖體的兩個結(jié)合位點，對于原核而言是 AUG（起始密碼）和 SD 序列。
轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的最后一個外顯子中有一個 AATAAA 的保守序列，此位點 down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號。結(jié)構(gòu)基因的最后一個外顯子中有一個 AATAAA 的保守序列，此位點 down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號。
第六步：質(zhì)粒圖譜上的箭頭。
有的箭頭順時針有的箭頭逆時針，那其實是代表兩條 DNA 鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈 DNA，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。