一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />
1.證明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與體表存在的微生物
2.觀察不同類(lèi)型的微生物的形態(tài)特征
3.比較不同場(chǎng)所不同條件下的細(xì)菌的數(shù)量和類(lèi)型
二.實(shí)驗(yàn)器材:
培養(yǎng)基:肉膏蛋白胨瓊脂平板。
溶液和試劑:無(wú)菌水。
儀器和其他用品:滅菌棉簽(裝在試管內(nèi)),試管架,煤氣燈或酒精燈,記號(hào)筆和廢物缸等。
三.實(shí)驗(yàn)原理:
平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)成分,當(dāng)取自不同來(lái)源的樣品接種于培養(yǎng)基上,在適宜溫度下培養(yǎng)1-2d內(nèi)每一菌體即能通過(guò)很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖,形成一個(gè)可見(jiàn)的細(xì)胞群體集落,稱(chēng)為菌落。
每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn),例如菌落的大小,表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑,邊緣整齊或不整齊,菌落透明或半透明或不透明,顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此,可通過(guò)平板培養(yǎng)來(lái)檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類(lèi)。
四.實(shí)驗(yàn)步驟:
1.培養(yǎng)基的制作
(1)稱(chēng)量
制作二十個(gè)肉高蛋白瓊脂平板牛肉膏1.65g 蛋白胨5.5g Nacl2.75g 瓊脂10g 水550ml pH7.0~7.2 121℃滅菌20min
(2) 熔化
按上述順序?qū)⒉牧戏謩e放到一大燒杯中混合加熱至其熔化。
(3) 調(diào)節(jié)PH值
待瓊脂熔化后,調(diào)節(jié)溶液PH至7.0~7.2。
(4) 轉(zhuǎn)移滅菌
將溶液從燒杯中轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,塞上棉塞加牛皮紙包裹后同洗凈的培養(yǎng)基和放有棉塞的試管一同放入高壓滅菌鍋里,滅菌20min左右。
(5)接種
最后,將錐形瓶中溶液在酒精燈火焰旁轉(zhuǎn)移至滅菌后的培養(yǎng)皿中,等待其冷卻固定后便可接種。
2. 微生物的獲取和接種
(1)分梯度制作空氣培養(yǎng)基
取三個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)基分別標(biāo)號(hào)3-3-空氣-5ˊ-1-37°,3-3-空氣-5ˊ-2-37°,3-3-空氣-5ˊ-3-28°同時(shí)開(kāi)蓋放置五分鐘后蓋上蓋子,另取三個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)基分別標(biāo)號(hào)3-3-空氣-10ˊ-1-37°,3-3-空氣-10ˊ-2-37°,3-3-空氣-10ˊ-3-28°
(2) 對(duì)比接種手上的微生物
取一無(wú)菌培養(yǎng)基,在火焰旁無(wú)菌區(qū)內(nèi),使用滅菌處理后的棉棒沾一下未洗手之前的手,然后再接種到剛?cè)〕龅臒o(wú)菌培養(yǎng)基上。之后分別使用同樣的方法,制作另外兩個(gè)手微生物的培養(yǎng)基,三個(gè)培養(yǎng)基分別標(biāo)號(hào)為:3-3-手-前-1-37°,3-3-手-前-2-37°,3-3-手-前-3-28°。然后將手用去污粉洗凈,并使用同樣的方法,用無(wú)菌棒獲取手上同位置的微生物,分別標(biāo)號(hào)為:3-3-手-后-1-37°,3-3-手-后-2-37°,3-3-手-后-3-28°
(3):接種環(huán)境中的微生物
使用同樣的方法用無(wú)菌棉棒獲取實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌面、錢(qián)、衣服、手機(jī)上的微生物,分別標(biāo)號(hào)為:3-3-桌-1-37°,3-3-桌-2-37°,3-3-桌-3-28°,3-3-錢(qián)-37°,3-3-衣服-37°,3-3-手機(jī)-37°。
3.微生物的培養(yǎng):將標(biāo)號(hào)為37°的培養(yǎng)基放入37°培養(yǎng)箱中培養(yǎng),標(biāo)號(hào)為28°的培養(yǎng)基放入28°培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.微生物的觀察:
觀察微生物的數(shù)目,大小,干濕,形態(tài),邊緣,凹凸等。
5.微生物的分離與純化
挑選培養(yǎng)基中的典型微生物,進(jìn)行分離與純化。左手持要接種的培養(yǎng)基,右手持接種環(huán),將接種環(huán)在火焰上進(jìn)行灼燒滅菌,待其冷卻后,打開(kāi)培養(yǎng)基的蓋子,在火焰旁將接種環(huán)輕輕插入培養(yǎng)基中,挑取所要接種的微生物,然后另取一無(wú)菌培養(yǎng)基,將接種環(huán)插入作分區(qū)劃線。
然后蓋上蓋子,放置于桌面上。按照同樣的方法,制作該微生物的分離培養(yǎng)基10個(gè)以及另一典型微生物的分離培養(yǎng)基10個(gè)并標(biāo)號(hào)。
將二十個(gè)培養(yǎng)基均放入恒溫培養(yǎng)箱中在37°C條件下恒溫培養(yǎng)兩天左右,即可進(jìn)行觀察。
五.結(jié)果分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,空氣中的微生物種類(lèi)很多,而且數(shù)量龐大,其菌落表面粗糙,可見(jiàn)有很多無(wú)莢膜的種類(lèi)存在,比較混雜;實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌面上的微生物雖然數(shù)量較多,但是種類(lèi)明顯沒(méi)有空氣中多。還有就是錢(qián)上的微生物種類(lèi)與數(shù)目也極多。手指上的微生物前后對(duì)比差異不大,看來(lái)勤洗手并沒(méi)有很大作用。另外像衣服、手機(jī)上也有大量的微生物,只是數(shù)量明顯較少,而且種類(lèi)比較單一,多以細(xì)菌為主??傊?,生活中的微生物無(wú)處不在且數(shù)量和總類(lèi)繁多