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在siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，總是能看到正向轉(zhuǎn)染和反向轉(zhuǎn)染，那么到底什么是正向轉(zhuǎn)染，什么是反向轉(zhuǎn)染呢？?jī)烧叩膮^(qū)別是什么？
反向轉(zhuǎn)染操作流程中，siRNA先加入到培養(yǎng)板中，然后加入轉(zhuǎn)染試劑，復(fù)合物形成后再加入細(xì)胞。
正向轉(zhuǎn)染相反，正向轉(zhuǎn)染是先將細(xì)胞加入培養(yǎng)板然后再加轉(zhuǎn)染復(fù)合物。
也就是說，把細(xì)胞加到復(fù)合物中，那么就是反向轉(zhuǎn)染；把復(fù)合物加到細(xì)胞中就是正向轉(zhuǎn)染。
反向轉(zhuǎn)染已被廣泛使用，尤其在高通量實(shí)驗(yàn)中，因?yàn)榉聪蜣D(zhuǎn)染可以簡(jiǎn)單地被自動(dòng)化，且siRNA可被儲(chǔ)存在培養(yǎng)板中，無需使用另外的板形成siRNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物，這樣也節(jié)省了試劑。
反向轉(zhuǎn)染又稱為reverse transfection 或者neofection，和傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法相比區(qū)別在于，傳統(tǒng)方法需要提前一天接種鋪板，培養(yǎng)24時(shí)后等細(xì)胞到一定匯合度再加轉(zhuǎn)染復(fù)合物轉(zhuǎn)染；而反向轉(zhuǎn)染則是不用預(yù)先接種細(xì)胞，先加入轉(zhuǎn)染試劑和siRNA混合物在培養(yǎng)板上共同溫育，然后再加入細(xì)胞鋪板，培養(yǎng)。這個(gè)方法的好處不單是可以節(jié)約一整天的時(shí)間，而且轉(zhuǎn)染效率高。原因可能是由于細(xì)胞尚未貼壁時(shí)接觸轉(zhuǎn)染試劑siRNA 復(fù)合物的表面積更大，使得轉(zhuǎn)染效率更高。大量的細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)表明，其他條件相同的情況下反向轉(zhuǎn)染得到的RNA 干擾效果比傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法更好，連一些難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株如HepG2細(xì)胞也能得到非常好的RNAi 結(jié)果。在反向轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的密度不再困擾實(shí)驗(yàn)人員，有實(shí)驗(yàn)表明，收獲細(xì)胞時(shí)細(xì)胞密度對(duì)RNAi 結(jié)果沒有明顯的影響，而胰酶處理收獲細(xì)胞后，讓懸浮的細(xì)胞和轉(zhuǎn)染復(fù)合物混合后再鋪板培養(yǎng)，既比傳統(tǒng)方法節(jié)約了一天培養(yǎng)時(shí)間，也不用考慮細(xì)胞密度這個(gè)問題。
反向轉(zhuǎn)染的概念適合高通量轉(zhuǎn)染的需求，使得轉(zhuǎn)染不再停留在手工操作上。在實(shí)際的高通量操作，為方便操作，流程也可改為先加稀釋的siRNA，再加稀釋的轉(zhuǎn)染試劑，溫育一定時(shí)間后加細(xì)胞。
Qiagen "Fast Foward"轉(zhuǎn)染的方法，即在傳統(tǒng)方法接種鋪板后，無需等待一天，立即配置轉(zhuǎn)染復(fù)合物，然后加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物溫育。不過生物通小編個(gè)人覺得這2種方法差別無非是先加細(xì)胞還是先加轉(zhuǎn)染復(fù)合物的問題，并且，先加轉(zhuǎn)染試劑再加細(xì)胞，還可以減少溫度反復(fù)變化對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，我個(gè)人覺得更優(yōu)一些。