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ATCC原代細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞株不同，兩者在培養(yǎng)過(guò)程中的操作方法也不一樣。這里對(duì)原代細(xì)胞操作過(guò)程中容易出現(xiàn)的6個(gè)錯(cuò)誤及對(duì)應(yīng)方法做一個(gè)說(shuō)明。
1.長(zhǎng)時(shí)間水浴解凍
因?yàn)樵?xì)胞非常容易受到解凍過(guò)程的影響，所以在37℃水浴鍋中解凍時(shí)，要在水中擺動(dòng)溶解。在細(xì)胞半溶后（不要等到全部溶解），迅速拿到生物安全柜或超凈臺(tái)中，用1ml的槍，抽出事先準(zhǔn)備好的完全培養(yǎng)基打入凍存管中，然后抽到培養(yǎng)瓶中，反復(fù)進(jìn)行，直至完全溶解
2.把凍存管的細(xì)胞溶解后迅速離心
如果原代細(xì)胞溶解后馬上離心，細(xì)胞所受的打擊可能比DMSO的毒性還要大，不建議采用這個(gè)方法。用帶有血清的完全培養(yǎng)基溶解后鋪瓶，第二天換液去除DMSO。
3.讓原代細(xì)胞長(zhǎng)滿（100%）瓶（皿、板）
原代細(xì)胞長(zhǎng)滿后，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)老化。因?yàn)樵?xì)胞不是100%的細(xì)胞團(tuán)，把混入的細(xì)胞控制在最小限度非常重要。建議細(xì)胞長(zhǎng)到90-95%進(jìn)行傳代
4.傳代時(shí)用大量的胰蛋白酶處理
原代細(xì)胞傳代時(shí)，要用低濃度的胰蛋白酶消化，在顯微鏡下看到細(xì)胞開始變圓、脫落后迅速終止胰蛋白酶。建議采用含10%血清的完全培養(yǎng)基終止或大豆由來(lái)的蛋白酶終止劑終止。
5.細(xì)胞培養(yǎng)后再凍存
原代細(xì)胞再凍存后，細(xì)胞會(huì)老化、也可能引起機(jī)能變化，所以不建議再凍存。細(xì)胞再凍存也是細(xì)胞死傷的主要原因。
6.原代細(xì)胞無(wú)限增殖
原代細(xì)胞和細(xì)胞系不同，增殖能力是有限的。為了防止遺傳上的變化，最好盡快開始做實(shí)驗(yàn)。另外，為了防止混入雜細(xì)胞比例的增加，要經(jīng)常觀察細(xì)胞形態(tài)。