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1 美藍(lán)染色法
1.1 呂氏堿性美藍(lán)染色液美藍(lán) 0.3g95%乙醇 30mL0.01%氫氧化鉀溶液 100mL將美藍(lán)溶解于乙醇中,然后與氫氧化鉀溶液混合。
1.2 染色法將涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1~3min,水洗,待干,鏡檢。2.1.3 結(jié)果菌體呈藍(lán)色。
2 革蘭氏染色法
2.1 結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫 1g95%乙醇 20mL1%草酸銨水溶液 80mL將結(jié)晶紫溶解于乙醇中,然后與草酸銨溶液混合。
2.2 革蘭氏碘液碘 1g碘化鉀 2g蒸餾水 300mL將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合,加入蒸餾水少許,充分振搖,待完全溶解后,再加蒸餾水至300mL。
2.3 沙黃復(fù)染液沙黃 0.25g95%乙醇 10mL蒸餾水 90mL將沙黃溶解于乙醇中,然后用蒸餾水稀釋。
2.4 染色法
2.4.1 將涂片在火焰上固定,滴加結(jié)晶紫染色液,染1min,水洗。
2.4.2 滴加革蘭氏碘液,作用1min,水洗。
2.4.3 滴加95%乙醇脫色,約30s;或?qū)⒁掖嫉螡M整個(gè)涂片,立即傾去,再用乙醇滴滿整個(gè)涂片,脫色10s。
2.4.4 水洗,滴加復(fù)染液,復(fù)染1min。水洗,待干,鏡檢。
2.5 結(jié)果革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。革蘭氏陰性菌呈紅色。注:亦可用1:10稀釋石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染液,復(fù)染時(shí)間僅需10s。
3 耐酸性染色法(萎-倪二氏法)
3.1 石炭酸品紅染色液堿性品紅 0.3g95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL將品紅溶解于乙醇中,然后與酚溶液混合。
3.2 3%鹽酸-乙醇濃鹽酸 3mL95%乙醇 97mL
3.3 復(fù)染液呂氏堿性美藍(lán)染色液。
3.4 染色法
3.4.1 將涂片在火焰上加熱固定,滴加石炭酸品紅染色液,徐徐加熱至有蒸氣出現(xiàn),但切 不可使沸騰。染液如因蒸發(fā)減少時(shí),應(yīng)隨時(shí)添加。染5min,傾去染液,水洗。
3.4.2 滴加鹽酸-乙醇脫色,直至無(wú)紅色脫落為止(所需時(shí)間視涂片厚薄而定,一般為1~3min),水洗。
3.4.3 滴加呂氏堿性美藍(lán)染色液,復(fù)染30s~1min,水洗,待干,鏡檢。
3.5 結(jié)果:耐酸性細(xì)菌呈紅色,其他細(xì)菌、細(xì)胞等物質(zhì)呈藍(lán)色。