細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低？首先了解這幾點(diǎn)！
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-12-19 08:36:57
1.準(zhǔn)備不足
做細(xì)胞轉(zhuǎn)染的時(shí)候，在開展正式實(shí)驗(yàn)前要多做預(yù)試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：轉(zhuǎn)染試劑的用量、DNA密度、細(xì)胞密度、試劑和DNA混合孵育時(shí)間等等。
2.細(xì)胞污染
細(xì)胞污染也是造成細(xì)胞死亡，轉(zhuǎn)染效率低下的一大原因。首先，轉(zhuǎn)染細(xì)胞用的質(zhì)粒必須保證無(wú)菌。而現(xiàn)在市場(chǎng)上的一般的質(zhì)粒提取試劑盒都做不到絕對(duì)無(wú)菌。分享一個(gè)小秘訣：將提完質(zhì)粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。
3.質(zhì)粒質(zhì)量問題
轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒首先要保證數(shù)量，一般為2μg以上。質(zhì)粒純度不夠或者含有細(xì)菌LPS或其他對(duì)細(xì)胞有毒害作用的物質(zhì)，也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。這個(gè)時(shí)候，就應(yīng)該對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行純化和濃縮。
4.細(xì)胞狀態(tài)不好
細(xì)胞狀態(tài)不好，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。一般進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。如果是貼壁細(xì)胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如果是懸浮細(xì)胞的話，應(yīng)該是6×105個(gè)/孔（24孔板），一般是轉(zhuǎn)染前一天換液，轉(zhuǎn)染前用無(wú)血清培養(yǎng)基或PBS洗細(xì)胞一次。
5.轉(zhuǎn)染試劑問題
脂質(zhì)體試劑毒性較大，易造成細(xì)胞死亡和轉(zhuǎn)染效率底下。可選擇非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑
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