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一、液體培養(yǎng)
液體培養(yǎng)方法即結(jié)核桿菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，因液體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分復(fù)雜并往往添加了促生長(zhǎng)因子，能為結(jié)核桿菌的生長(zhǎng)提供充分的營(yíng)養(yǎng)；且結(jié)核桿菌在液體環(huán)境中生長(zhǎng)能充分接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收更加充分；此外，液體培養(yǎng)還加人多種的抗菌素能抑制雜菌的生長(zhǎng)。
(一)手工法培養(yǎng)
手工法使用的液體培養(yǎng)基以Middlebrook系列為主為復(fù)合型培養(yǎng)基，有基質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)增加劑和抗生素組成，也有商品化的組分出售，使用時(shí)將不同組分混合，此種培養(yǎng)基多用于科研、疾病監(jiān)測(cè)。主要有Middlebrook 7H9和Sauton培養(yǎng)基。
(二)自動(dòng)法培養(yǎng)
為了能提高結(jié)核桿菌檢測(cè)效能，簡(jiǎn)便培養(yǎng)操作、縮短培養(yǎng)時(shí)間，自動(dòng)化的結(jié)核桿菌培養(yǎng)系統(tǒng)被發(fā)展。
1．BACTEC 460系統(tǒng)：1969年Deland and Wagner發(fā)明了采用放射性14C棕櫚酸為底物，檢測(cè)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基生長(zhǎng)過(guò)程中釋放出的含有放射性的14CO2，計(jì)算出細(xì)菌生長(zhǎng)指數(shù)GL的半自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)。1980年該項(xiàng)技術(shù)被應(yīng)用到了結(jié)核桿菌培養(yǎng)中，BACTEC 460 TB分枝桿菌培養(yǎng)和藥敏檢測(cè)系統(tǒng)出現(xiàn)了。該檢測(cè)系統(tǒng)能自動(dòng)檢測(cè)結(jié)核桿菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況，對(duì)涂陽(yáng)和涂陰標(biāo)本都有很好的分離培養(yǎng)效果，與傳統(tǒng)L—J培養(yǎng)方法比較分離培養(yǎng)臨床標(biāo)本的陽(yáng)性率能提高15％～20％，且培養(yǎng)時(shí)問(wèn)較L—J培養(yǎng)方法的3～5周時(shí)間縮短為8～14 d。
2．BACTEC MGIT 960系統(tǒng)：BACTEC MGIT 960系統(tǒng)是在BACTEC 460 TB基礎(chǔ)上改進(jìn)的，使用了分枝桿菌生長(zhǎng)指示管(MGIT)。MGIT培養(yǎng)管底部的硅樹脂中含有氧淬滅熒光劑，當(dāng)分枝桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中吸收散布在培養(yǎng)管中的O2，排放出CO2，隨著管中O2的逐漸損耗，熒光劑不再被抑制，當(dāng)使用紫外光進(jìn)行觀察時(shí)，MGIT培養(yǎng)管便會(huì)發(fā)出熒光。并且，熒光的強(qiáng)度直接與O2的消耗成正相關(guān)。MGIT在BACTEC MGIT 960系統(tǒng)上使用，該系統(tǒng)能定時(shí)收集結(jié)核桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的化學(xué)信號(hào)等變化，自動(dòng)報(bào)告監(jiān)測(cè)結(jié)果，實(shí)現(xiàn)了結(jié)核桿菌培養(yǎng)的全自動(dòng)化的。BACTEC MGIT 960解決了BACTEC 460 TB放射物質(zhì)污染的問(wèn)題，對(duì)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員更加的安全。
3．BacT/ALERT 3D系統(tǒng)：BacT/ALERT 3D檢測(cè)系統(tǒng)是通過(guò)檢測(cè)液體培養(yǎng)基中釋放CO2的量來(lái)確定是否有細(xì)菌生長(zhǎng)的。當(dāng)分枝桿菌在培養(yǎng)管中生長(zhǎng)過(guò)程中代謝產(chǎn)生CO2，這時(shí)培養(yǎng)瓶底部的透氣傳感器顏色會(huì)發(fā)生變化使系統(tǒng)監(jiān)測(cè)的反射率增加，發(fā)光二極管(LED)將光線投射到傳感器上，由一個(gè)光電探測(cè)器測(cè)量反射光，產(chǎn)生的CO2越多，則被反射的光就越多，將產(chǎn)生CO2的量值與標(biāo)本瓶中初始的CO2水平相比較，通過(guò)儀器報(bào)告陽(yáng)性或陰性。
4．VersaTrek分枝桿菌液體培養(yǎng)系統(tǒng)：分枝桿菌液體培養(yǎng)VersaTrek依據(jù)壓力傳感檢測(cè)技術(shù)，集中了血培養(yǎng)和結(jié)核桿菌培養(yǎng)，但該技術(shù)因生物安全和操作技術(shù)缺陷限制了在結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室的使用。
總之，液體培養(yǎng)能提高結(jié)核桿菌分離陽(yáng)性率，縮短培養(yǎng)時(shí)間；但是，液體培養(yǎng)不能根據(jù)肉眼觀察菌落形態(tài)，培養(yǎng)陽(yáng)性產(chǎn)物，需涂片染色鏡檢判斷是否是結(jié)核桿菌；自動(dòng)化的檢測(cè)設(shè)備能簡(jiǎn)便檢測(cè)操作，降低實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險(xiǎn)，但成本大幅的提高，增加了診斷費(fèi)用。
二、藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)方法
為獲得結(jié)核桿菌是否對(duì)藥物的耐受性，經(jīng)常在體外使用藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)方法進(jìn)行檢測(cè)，藥敏試驗(yàn)方法就是在含一定藥物的培養(yǎng)基上接種一定數(shù)量的結(jié)核桿菌，當(dāng)結(jié)核桿菌能在抑制其生長(zhǎng)的最低藥物濃度(MIC)下生長(zhǎng)時(shí)被界定為耐藥菌株，反之則定為敏感菌株。藥敏試驗(yàn)使用的培養(yǎng)基主要有固體和液體培養(yǎng)基；主要的方法有絕度濃度法和比例法。絕度濃度法將10-3 mg結(jié)核桿菌接種于高、低兩個(gè)藥物濃度的培養(yǎng)基上，試驗(yàn)結(jié)果能在一定程度上反映結(jié)核桿菌的耐藥程度，但絕對(duì)濃度法對(duì)結(jié)核桿菌的接種量要求十分嚴(yán)格，接種量過(guò)大會(huì)產(chǎn)生假耐藥結(jié)果。比例法能減少絕對(duì)濃度法對(duì)結(jié)核桿菌接種量的嚴(yán)格要求，比例法將高、低兩個(gè)濃度的結(jié)核桿菌同時(shí)接種于含藥和空白對(duì)照培養(yǎng)基上，通過(guò)比較含藥和空白培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的CFU，當(dāng)生長(zhǎng)在含藥培養(yǎng)基的菌群大于空白培養(yǎng)基生長(zhǎng)菌群1％時(shí)，則判為該結(jié)核桿菌耐藥，反之，則判為敏感。
三、液體藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)方法
2008年WHO制定和發(fā)布了二線抗結(jié)核藥物的藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)性文件。發(fā)布規(guī)定了一、二線藥物試驗(yàn)中不同培養(yǎng)基使用的藥物含量，固體培養(yǎng)基有LJ、7H10和7H11，液體培養(yǎng)基為BACTEC 460和BACTEC MGIT 960。當(dāng)今結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室使用的液體藥敏試驗(yàn)方法主要為BACTEC MGIT 960的改良比例法藥敏試驗(yàn)。BACTEC MGIT 960有一線結(jié)核藥物(異煙肼、利福平、乙胺丁醇和鏈霉素)培養(yǎng)基，還有獨(dú)特的吡嗪酰胺培養(yǎng)基，因吡嗪酰胺僅能在酸性的環(huán)境下發(fā)揮作用，在中性pH值培養(yǎng)基不能發(fā)揮作為，一般培養(yǎng)基不能進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。對(duì)于二線藥物，BACTEC MGIT 960尚未推出商品化的培養(yǎng)基，需要使用者自己添加藥物配制，WHO推薦了用于BACTEC MGIT 960培養(yǎng)基中的二線藥物含量。
四、質(zhì)量控制
實(shí)驗(yàn)室中只有受到質(zhì)量控制的試驗(yàn)方法才能保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性?！斗种U菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》是國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室參照WHO推薦的方法對(duì)結(jié)核桿菌培養(yǎng)制定的質(zhì)量控制程序，對(duì)于常規(guī)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的質(zhì)量控制有兩個(gè)參考指標(biāo)，一定時(shí)期內(nèi)的污染率和涂陽(yáng)培陰率，培養(yǎng)污染率應(yīng)控制在2％～5％；針對(duì)初治結(jié)核病患者的涂陽(yáng)培陰率應(yīng)控制在10％內(nèi)。若培養(yǎng)污染率小于2％，表明該實(shí)驗(yàn)室在分離培養(yǎng)前期去污染過(guò)程分枝桿菌被殺滅太多，存在過(guò)度處理的問(wèn)題；若污染率大于5％，又表明去污染不充分雜菌沒(méi)有被殺滅，前處理不夠。但通常液體培養(yǎng)污染率要高于固體培養(yǎng)，對(duì)于液體培養(yǎng)更加要防止操作過(guò)程的污染。涂陽(yáng)培陰率若高于10％，則表明該實(shí)驗(yàn)室涂片顯微鏡檢查質(zhì)量有問(wèn)題或培養(yǎng)技術(shù)達(dá)不到要求。
結(jié)核桿菌培養(yǎng)是依據(jù)結(jié)核桿菌的生長(zhǎng)規(guī)律，根據(jù)營(yíng)養(yǎng)和代謝需要的條件，人工營(yíng)造提供出有利于結(jié)核桿菌生長(zhǎng)而抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng)的環(huán)境，達(dá)到分離出結(jié)核桿菌的目的。結(jié)核桿菌培養(yǎng)中依據(jù)培養(yǎng)基形狀的不同主要分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，據(jù)此可將培養(yǎng)方法分為固體和液體培養(yǎng)。固體培養(yǎng)主要有以雞卵液為基質(zhì)并含高濃度孔雀綠抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng)的羅氏、改良羅氏培養(yǎng)基及以瓊脂為基質(zhì)的Middlebrook7H10或7H11。固體培養(yǎng)成本低、污染率低，培養(yǎng)成功率高，通過(guò)觀察形成的菌落形態(tài)能得到初步的鑒別，適于各級(jí)實(shí)驗(yàn)室的廣泛使用，但固體培養(yǎng)相對(duì)時(shí)間較長(zhǎng)，陰性培養(yǎng)結(jié)果需要觀察8周，陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果平均需要3～4周才能觀察到明顯的菌落，較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間降低了臨床應(yīng)用價(jià)值。