1.培養(yǎng)基配方的選定
同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外．一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料．加以比較核對．再依據(jù)自己的使用目的加以選用，記錄其來源。
2 ．培養(yǎng)基的制備記錄
每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)推各稱，配方及其來源．和各種成份的牌號(hào)。最終pH 值、消毒的溫度和時(shí)間制各的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。
3.培養(yǎng)基成分的稱取
培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂．最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后．還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。
4.培養(yǎng)基各成份的混合和溶化
培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化．也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)，以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。
5.培養(yǎng)塞pH 的初步調(diào)整
培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH 的初步調(diào)正，因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH 會(huì)有所變化，例如，牛肉浸液約可降低pH0.2.而腸浸液pH 卻會(huì)有顯著的升高。因此，對這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終pH ，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH 調(diào)正后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。
6．培養(yǎng)基的過濾澄清
液體培養(yǎng)基必須絕對澄清，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無顯著沉淀，因此，須要采用過濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法，濾紙應(yīng)拆疊成折扇成漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55-60℃ 的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi)，裝入量不得超過燒瓶容量的1/ 2 ，每1000ml 培養(yǎng)基加入1-2個(gè)雞蛋的蛋白．強(qiáng)力振搖3-5 分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。
若能自行沉淀者，亦可靜置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。
7.培養(yǎng)基的分裝
培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/ 3 。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還雙用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)最好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂抖面培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能形成2 / 3 底層和1/ 3 斜面的量為恰當(dāng)。分裝容器應(yīng)予先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml 培養(yǎng)基于一小玻瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，以為測定該批培養(yǎng)基最終pH之用。
8.培養(yǎng)基的滅菌
一般培養(yǎng)基可采用121℃ 高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中，如無特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類，應(yīng)另行配成20% 如或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)從無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50℃ 左右的培養(yǎng)基中。
瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出、待冷至55-60℃時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面、待其自然凝固。
9. 培養(yǎng)基的質(zhì)量測試
每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測定其最終pH。將全部培養(yǎng)基放入36±1℃恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1～2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24～48小時(shí)，如無菌生長或生長不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。
9.1 澄清度
水是細(xì)胞培養(yǎng)基的溶劑。細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分只有完全溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取，細(xì)胞才能生長增殖，因此細(xì)胞培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項(xiàng)目是通過對水溶解后的細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨB進(jìn)行。
9.2 pH值
哺乳類動(dòng)物細(xì)胞生長需要合適的酸堿度，pH過高或者過低都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。pH值的測定也可以檢查細(xì)胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定取規(guī)定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規(guī)定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細(xì)胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校準(zhǔn)后的酸度計(jì)進(jìn)行測定。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行；加入規(guī)定量的碳酸氫鈉到上述溶液中，按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進(jìn)行。
9.3 干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)
細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置水分會(huì)很快升高，干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示產(chǎn)品中含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營養(yǎng)成分有利于微生物生長，控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細(xì)胞培養(yǎng)基的養(yǎng)分。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進(jìn)行。
9.4 滲透壓
溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱為滲透，阻止?jié)B透所需施加的壓力，稱為滲透壓。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞借助K＋、Na＋維持滲透平衡。大多數(shù)細(xì)胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細(xì)胞脫水萎縮，培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細(xì)胞膨脹破裂，因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進(jìn)行。
9.5 細(xì)菌內(nèi)毒素
細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。它的特殊性在于不是細(xì)菌或細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，而是細(xì)菌死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基細(xì)菌內(nèi)毒素過高，對生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細(xì)菌內(nèi)毒素。因此本項(xiàng)目的檢驗(yàn)符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)定為＜10EU/ml。稱取本品規(guī)定量（見表4-12）的1/100，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水10mL溶解，吸取該溶液0.1mL加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水3.9mL，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中的凝膠法進(jìn)行。
9.6 微生物限度
細(xì)胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效。控制細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌，是延長細(xì)胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并嚴(yán)于該標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的細(xì)菌數(shù)每1g不得超過200個(gè)，霉菌數(shù)每1g不得超過50個(gè)。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項(xiàng)目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。
9.7 細(xì)胞生長試驗(yàn)
這是一個(gè)性能特性表述的要求。細(xì)胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞，因此經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的直觀表述，這也是很多生物制藥用戶要求的一項(xiàng)指標(biāo)。目前國內(nèi)尚無細(xì)胞培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細(xì)胞計(jì)數(shù)法論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，前四天用含10%小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基中是否有不利細(xì)胞生長的毒素。本試驗(yàn)用細(xì)胞為VERO細(xì)胞。
10.培養(yǎng)基的保存
培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過一周，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制各記錄副頁或明顯標(biāo)簽。