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枯草芽孢桿菌的自然轉化模式和特點 !
中國微生物菌種查詢網 / 2018-08-22 14:56:34

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一、枯草芽孢桿菌的自然轉化模式 
1、  細菌生長在一定的培養(yǎng)條件下生長到一定階段,以枯草芽孢桿菌為例是在葡萄糖基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)到對數(shù)生長末期到穩(wěn)定期,細胞向胞外分泌一種小分子的蛋白質,稱為感受態(tài)因子,其分子量為 5000到 10000道爾頓。 
2、  當培養(yǎng)液中的感受態(tài)因子積累到一定濃度后,與細胞表面受體相互作用,通過一系列信號傳遞系統(tǒng)誘導一些感受態(tài)一特異蛋白質(competence  specific  protein)表達,其中一種是自溶素(autolysin),它的表達使細胞表面的  DNA 結合蛋白及核酸酶裸露出來,使其具有與 DNA 結合的活性。 
3、DNA 以雙鏈形式在細胞表面的幾個位點上結合并遭到核酸酶的切割,核酸內切酶首先切斷 DNA 雙鏈中的一條鏈,被切斷的鏈遭到核酸酶降解,成為寡核苷酸釋放到培養(yǎng)基中,另一條鏈與感受態(tài)一特異蛋白質結合,并被引導進入細胞, 
4、  進入細胞的外源 DNA 通過同源重組以置換的方式整合進受體染色體 DNA,經復制和細胞分裂后形成重組體。
二、枯草芽孢桿菌的自然轉化特點 
1、 枯草芽孢桿菌等革蘭氏陽性菌細胞對雙鏈 DNA 的吸附和攝取是沒有特異性的,轉化是否成功及轉化效率的高低主要取決于轉化給體菌株和轉化受體菌株之間的親源關系,關系越近,則 DNA 之間的同源性也越高,就越容易在 DNA 之間發(fā)生重組,產生轉化子。 
2、自然感受態(tài)除了對線型染色體 DNA分子的攝取外,也能攝取質粒 DNA,但在通常情況下質粒的自然轉化效率要低得多,  這是因為質粒作為細菌染色體外獨立存在的遺傳物質和染色體 DNA同源性很差(否則會因為和染色體 DNA之間的重組而不穩(wěn)定) ,這樣被切割成單鏈后進入細胞的質粒  DNA 將很難通過重組重新恢復成有活性的狀態(tài)(雙鏈閉合環(huán)狀) ,或通過整合進染色體而使相關性狀得到表達;如要提高質粒的自然轉化效率,可以用二種方法:i)使質粒形成多聚體,這樣進入細胞后重新組合成有活性的質粒的幾率大大提高;ii)在質粒上插入受體菌染色體的部分片段,或將質粒轉化進含有與該質粒具有同源區(qū)段的質粒的受體菌重組獲救。 
3、 噬菌體 DNA 也可被感受態(tài)細胞攝取并產生有活性的病毒顆粒,這個過程被稱為轉染(transfection),其特點是提純的噬菌體 DNA以轉化的(而非病毒感染)途徑進入細胞并表達后產生完整的病毒顆粒。 現(xiàn)在把 DNA轉移至動物細胞的過程也稱轉染。 

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