細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
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問(wèn)題 |
原因 |
解決方案 |
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細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基使用不當(dāng) |
按照生產(chǎn)商的建議，使用相應(yīng)的預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 |
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生長(zhǎng)培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差 |
使用其他批次血清。 |
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傳代操作不當(dāng) |
按照生產(chǎn)商的建議消化時(shí)間及傳代比例進(jìn)行操作。 |
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換液過(guò)于頻繁 |
降低換液頻率，參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。 |
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細(xì)胞傳代次數(shù)過(guò)多 |
使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。 |
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細(xì)胞生長(zhǎng)超過(guò)匯合狀態(tài) |
哺乳動(dòng)物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行，建議細(xì)胞密度達(dá)80-90%傳代。 |
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細(xì)胞被支原體污染 |
將細(xì)胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細(xì)胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。 |
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細(xì)胞復(fù)蘇存活率低 |
細(xì)胞凍存不當(dāng) |
新取一只凍存細(xì)胞，并儲(chǔ)存在液氮中。將細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中，直至復(fù)蘇。 |
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自行制備的凍存細(xì)胞無(wú)活性 |
將細(xì)胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。 |
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制備凍存細(xì)胞時(shí)使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞 |
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嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細(xì)胞。請(qǐng)注意本手冊(cè)推薦的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。 |
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新取一只凍存細(xì)胞。 |
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細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng) |
嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請(qǐng)注意本手冊(cè)推薦的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。 |
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確保冷凍細(xì)胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。 |
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復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng) |
使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。 |
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細(xì)胞稀釋過(guò)度 |
按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細(xì)胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。 |
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處理細(xì)胞時(shí)動(dòng)作不過(guò)輕柔 |
凍存盒復(fù)蘇過(guò)程對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)造成不利影響。不要通過(guò)渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法時(shí)細(xì)胞脫落（培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞除外），也不要高速離心細(xì)胞。 |
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凍存液中所用保護(hù)劑在儲(chǔ)存過(guò)程中未避光 |
如果未避光儲(chǔ)存，凍存保護(hù)劑會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)細(xì)胞有毒性的物質(zhì)；新取一只凍存保護(hù)劑，重新凍存細(xì)胞。 |