細(xì)胞復(fù)蘇
1. 將裝有凍存細(xì)胞的凍存管從液氮罐中取出,立即放入37℃水浴中;
2. 在37℃水浴中輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)凍存管,直到凍存管內(nèi)僅剩余一小塊冰芯,使細(xì)胞迅速解凍(1分鐘內(nèi));
3. 將凍存管轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)內(nèi);打開(kāi)蓋子前,用75%酒精擦拭凍存管外部;
4. 將解凍的細(xì)胞逐滴轉(zhuǎn)移到裝有適量經(jīng)過(guò)預(yù)熱、適合該細(xì)胞系的完全生長(zhǎng)的培養(yǎng)基的離心管內(nèi);
5. 以大約200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心3-5分鐘;實(shí)際離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi);
6. 離心后,檢查上清液是否清澈,有無(wú)完整的細(xì)胞沉淀;在無(wú)菌條件下,小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀;
7. 輕輕將細(xì)胞重新懸液在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,然后轉(zhuǎn)移到合適的偏倚容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中(注:培養(yǎng)瓶尺寸取決于凍存管凍存的細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)環(huán)境取決于細(xì)胞和培養(yǎng)基類(lèi)型)。