細(xì)胞名稱 草魚腎細(xì)胞;GIK
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 GIK的克隆系。
培養(yǎng)條件 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C18
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
1)提供的是處理生長狀態(tài)的細(xì)胞,千萬不能放置冰箱,如果短時間,可放置室溫,最好放置25度培養(yǎng)箱。
2)提供的細(xì)胞,置T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi),瓶外用塑料袋包裝,塑料袋內(nèi)應(yīng)無液體滲漏。
3)貼壁生長的滿瓶細(xì)胞培養(yǎng)基對著燈光看應(yīng)是透明的。如果是懸浮細(xì)胞,除懸浮成團(tuán)細(xì)胞外,培養(yǎng)基對著燈光看也應(yīng)是透明的,半貼壁細(xì)胞除成塊脫落細(xì)胞外,培養(yǎng)基也應(yīng)是透明的。如果培養(yǎng)基存在混濁,變黃,則應(yīng)存在微生物污染。
4)細(xì)胞的初步觀察可直接在滿培養(yǎng)基時顯微鏡下進(jìn)行,
5)要求用吸管慢慢吸出培養(yǎng)基,嚴(yán)禁直接傾倒。要求換新瓶培養(yǎng)細(xì)胞
6)因運輸途中細(xì)胞處于非正常條件,部分細(xì)胞會死亡,換瓶細(xì)胞是最好1:1,以保證細(xì)胞處于合適的密度中,滿足細(xì)胞生長時的密度依賴性。7)如果同時寄2瓶相同細(xì)胞,建議在收到細(xì)胞后,先按要求操作一瓶,另一瓶細(xì)胞第二天操作,避免系統(tǒng)性污染風(fēng)險。
8)每株細(xì)胞都有操作要求,請嚴(yán)格按操作要求提供細(xì)胞生長所需的培養(yǎng)基,生長條件,特別是首次傳代方法。
正確的接收處理細(xì)胞是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵,如果在接收中還存在任何疑問,請向有細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的老師請教或直接與我們聯(lián)系,在完全消除疑惑后再按指導(dǎo)的正確方法操作。
①培養(yǎng)基:complete growth medium: Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids, and 1.0 mM sodium pyruvate, 90%; fetal bovine serum, 10% ,Temperature: 25-28C,5%CO2,如果沒有CO2培養(yǎng)箱,請在培養(yǎng)基中加入HEPPS,每升5克。,
②。瓶內(nèi)含5%FBS,請補(bǔ)加至10%FBS
貼壁細(xì)胞
1. 嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
2. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(此培養(yǎng)基可再用)。
3. 加入消化液1~1.5ml,37℃消化直到細(xì)胞脫落。
4. 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,加入步驟2的培養(yǎng)基8ml,再在25℃,5%CO2下培養(yǎng)。