質(zhì)粒DNA提取實驗
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2017-06-14 14:34:52
前提
細菌繁殖步驟（挑單克隆，置于LB培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫搖床搖過夜，180-200rpm）。
一般市面上有很多試劑盒可供大家使用，大體步驟都差不多的啦~~我按照我所使用的試劑盒（AxyPrep中抽試劑盒）的步驟分享如下：
收集
1.50ml離心管收集過夜搖菌的LB培養(yǎng)液（此時可以做一下判斷，如果液體未變渾濁，說明細菌并未繁殖成功，這樣肯定難以提出DNA；如果液體渾濁，便說明細菌繁殖成功啦，可繼續(xù)下面的操作）,6000g離心8min，棄上清。
裂解
2.加250μlBufferS1重懸細菌的沉淀，可以在渦旋儀上渦旋，使得沉淀全部重懸均勻，不留有小的菌塊。
3.加250μlBufferS2，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)4-6次混合均勻使菌體充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步驟不宜超過5min。
中和
4.加350μlBufferS3，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)混合6-8次，12,000×g離心10min。
5.質(zhì)粒DNA制備管插到負壓裝置的接口上。吸取步驟4中的離心上清并轉(zhuǎn)移到制備管中，開啟并調(diào)節(jié)負壓至-20-30英寸汞柱，緩慢吸走管中溶液。
結(jié)合
6.加500μlBufferW1，吸盡管中溶液。
7.加700μlBufferW2，吸盡管中溶液；以同樣的方法再用700μlBufferW2洗滌一次。
洗滌
8.將制備管置于2ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，12,000×g離心1min。
洗脫
9.將制備管移入新的1.5ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，在制備管膜中央加60-80μlEluent或去離子水，室溫靜置1min。12,000×g離心1min。
將Eluent或去離子水加熱至65℃將提高洗脫效率。
10.最后去檢測其濃度即可啦。