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微生物檢測培養(yǎng)基的配方及原理
中國微生物查詢網(wǎng)(www.vrmte.com) / 2016-12-26 09:49:11


   
1,月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)
 原 理:
 
月桂基硫酸鈉,別名月桂醇硫酸鈉,表面活性作用強,具有乳化作用。
 
一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨,是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化,濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨 20g 提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求 。
 配方:


名稱 用量 作用
 
胰蛋白胨 20g   提供碳源和氮源滿足細菌生長需要
 
氯化鈉         5g   氯化鈉可維持均衡的滲透壓
 
乳糖         5g   乳糖是大腸菌群可發(fā)酵的糖類
 
磷酸二氫鉀 2.75g   緩沖劑
 
磷酸氫二鉀 2.75g   緩沖劑
 
月桂基硫酸鈉 0.1g   可抑制非大腸菌群細菌的生長


PH 6.8±0.2
 
2,煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯(Brilliant Green Lactose Bile Broth)
原理:
 
膽鹽(Bile Salt):是一種膽酸的鈉鹽,是膽酸的羧基和甘氨酸或?;撬?C2H7NO3S)的氨基(C2H5NO2),通過酰胺鍵結(jié)合而成。
 
① 可降低培養(yǎng)基與細菌細胞膜界面上的表面張力,使細胞膜紊亂,導致細菌自溶。
 
②腸桿菌科細菌在腸道內(nèi)長期與膽汁接觸。對膽鹽有一定的抵抗力。合適的膽鹽量能促進該科細菌的生長。
 
③膽鹽遇酸生成沉淀,使菌落色素不致擴散從而有利于鑒別。
 
④ 膽鹽中含有一定量的膽紅素、粘蛋白、色氨酸,對不受膽鹽抑制的細菌生長有營養(yǎng)作用。
 
煌綠(亮綠):抑制革蘭氏陽性菌和大多數(shù)非沙門氏菌的革蘭氏陰性桿菌,通常抑制發(fā)酵乳糖、蔗糖的細菌?;途G和枸櫞酸鈉對大腸菌的生長、菌體蛋白質(zhì)的合成和糖的利用都有顯著的抑制作用,以煌綠的作用為較強。枸酸鈉能抑制大腸菌的呼吸,而煌綠的抑制作用則較弱?;旌夏扄}及硫代硫酸鈉對大腸菌的上述代謝活動都沒有抑制作用。
 配方:(g/L)
   名稱                    用量  作用
   蛋白胨 10g 提供氮源,碳源
   乳糖                     10g 大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣
   牛膽粉 20g 抑制非腸桿菌科細菌
   煌綠                0.0133g 抑制非腸桿菌科細菌 ,此處不作為指示劑使用
   PH                7.2±0.1    25℃
 用法:
 
將蛋白胨、乳糖溶于約500 ml蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200 ml(將20.0 g 脫水牛膽粉溶于200 ml 蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5),用蒸餾水稀釋到975 ml,調(diào)節(jié)pH,再加入0.1%煌綠水溶液13.3 ml, 用蒸餾水補足到1000 ml,用棉花過濾后,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10ml 。121 ℃高壓滅 15 min 。

3,伊紅美藍瓊脂(EMB)Eosin-Methylene Blue Agar
 原理:
 
伊紅美藍瓊脂含有伊紅和美藍兩種苯胺類染料,它們可以抑制革蘭氏陽性菌的生長。伊紅為酸性染料,美藍為堿性染料。當大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細菌帶正電荷被染成紅色,再與美藍結(jié)合形成紫黑色菌落,并帶有綠色金屬光澤。而產(chǎn)氣桿菌則形成呈棕色的大菌落。
 
在堿性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細菌不著色,伊紅和美藍不能結(jié)合,故沙門氏菌等為無色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養(yǎng)基上不生長。
 
常用的伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基,可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如果有大腸桿菌,因其強烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸,菌體帶H+,故菌落被染成深紫色,從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。
 配方:(g/L)
 
名稱     用量 作用
 
蛋白胨         10g 碳源、氮源、維生素、生長因子
 
乳糖         10g 碳源,提供能量
 
磷酸氫二鉀 2g 緩沖劑
 
瓊脂         15g 凝固劑
 
伊紅         0.4g 抑菌劑、顯色劑
 
美蘭        0.065g 抑菌劑、顯色劑
 
pH值 7.1±0.2      25℃
 用法:


稱取本品 37.4g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌 15分鐘, 備用。
 
4,EC肉湯 (E.Coli Broth)
 用途:
 
用于糞大腸菌群、大腸桿菌的測定(GB2008、SN標準)
 配方:(g/L)

名稱         用量 作用
 
胰蛋白胨 20g 提供氮源,碳源
 
乳糖         5g 大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣
 
氯化鈉         5g 維持平衡滲透壓
 
磷酸氫二鉀 4g 緩沖劑
 
磷酸二氫鉀 1.5g 緩沖劑
 
三號膽鹽 1.5g 抑制革蘭氏陽性菌的生長


pH值 6.9±0.2      25℃

5,營養(yǎng)瓊脂斜面 營養(yǎng)瓊脂(NA)Nutrient Agar
 用途:
 
細菌計數(shù)、不含糖,可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(GB標準)。
 配方:(g/L)

名稱 用量 作用
 
蛋白胨 10g 碳源、氮源、維生素、氨基酸
 
牛肉粉 3g 碳源、氮源、維生素、氨基酸
 
氯化鈉 5.0g 保持滲透壓
 
瓊脂 15g 凝固劑
 
pH值 7.3±0.1     

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