細胞培養(yǎng)是實驗室里最常見和最基本的實驗了，但卻不是最簡單的。別小看細胞培養(yǎng)，這里可蘊含著大學問。有時候細胞狀態(tài)不好，轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基說起。
經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、thermo fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應用最廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。
1.MEM是由Eagle’s基礎培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。
2.Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細胞設計的，現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。
3.aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應用于各種細胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細胞。
4.Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的，現(xiàn)在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。
5.RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細胞培養(yǎng)而設計的，現(xiàn)在已廣泛應用于懸浮細胞的培養(yǎng)。
以前經(jīng)常聽到有人問，這種細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單，也可以好復雜。此話怎講?如果這種細胞是購自ATCC或其他的細胞庫，那很簡單，問供應商就行了?；蛘哒业较嚓P的文獻，作為參考。Invitrogen網(wǎng)站上有一個Cell Line Database的工具，也很好用。選擇你感興趣的細胞類型，它就會彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉染試劑等，有時還有優(yōu)化好的轉染步驟，很方便。Sigma網(wǎng)站上也有一個Media Expert，包括了培養(yǎng)基所有成分的功能描述、使用推介和參考文獻等，它還是一個解決問題能手，對于細胞培養(yǎng)中的常見問題，如細胞貼壁不好、培養(yǎng)基變色等，它都會列出可能的原因，并提供補救辦法。這個Expert果然不簡單!
但如果你是著手建立一種全新細胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛。因為沒有一個標準答案。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊走xMEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細胞培養(yǎng)會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養(yǎng)基來，然后花大約兩周的時間做一個簡單的細胞生長實驗，來選擇其中最適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的最佳培養(yǎng)條件與文獻報道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件，細胞的生長狀態(tài)也時好時壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。
以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基，但配制過程就較為繁瑣，要溶解、調(diào)pH值，過濾，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差，而且有些實驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會有差異。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的，批間差會很小。大家是不是感覺液體培養(yǎng)基會貴很多，以前是這樣，但現(xiàn)在非也。MRC培養(yǎng)基價格也只是60元左右/500ml，比干粉培養(yǎng)基貴不了多少，而且還幫你省了過濾器和時間。
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