ATCC細(xì)胞系概述
ATCC的細(xì)胞系和雜交瘤細(xì)胞通常保存在凍存管中用干冰運(yùn)輸，或是在培養(yǎng)瓶中常溫運(yùn)輸。在收到凍存細(xì)胞后，很重要的一點(diǎn)是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養(yǎng)基中。如果做不到上面這點(diǎn)，需將細(xì)胞存儲(chǔ)在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在高于-130℃的溫度下，這會(huì)使細(xì)胞存活率迅速下降。
產(chǎn)品說(shuō)明書
ATCC細(xì)胞株寄送時(shí)附帶說(shuō)明書，說(shuō)明書中有關(guān)于處理細(xì)胞的詳細(xì)信息。簡(jiǎn)短版本的說(shuō)明書，可以在ATCC網(wǎng)站上找到或致電ATCC的技術(shù)服務(wù)部門索取。產(chǎn)品說(shuō)明書或COA文件中包含具體批次信息，如每管細(xì)胞的數(shù)量，建議分裂或傳代的比例，和已知細(xì)胞的傳代代次。
此步相當(dāng)重要，即使是平時(shí)常見細(xì)胞系或是師兄傳下的細(xì)胞系，都不要理所當(dāng)然的使用以往培養(yǎng)條件培養(yǎng)，拿到ATCC細(xì)胞，看說(shuō)明書，認(rèn)真讀說(shuō)明書，只信說(shuō)明書！重要事情說(shuō)三遍！
準(zhǔn)備培養(yǎng)基
復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)需要準(zhǔn)備合適的培養(yǎng)基，血清和細(xì)胞生長(zhǎng)所需的添加劑。大部分產(chǎn)品，可以在訂購(gòu)細(xì)胞系時(shí)從ATCC購(gòu)買。ATCC在培養(yǎng)和保存細(xì)胞時(shí)也是使用相同的試劑。（見注1）
注1：雖然大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但是當(dāng)培養(yǎng)基改變時(shí)，細(xì)胞的性質(zhì)也會(huì)變化。因此，使用ATCC推薦的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)獲得最好的效果（見產(chǎn)品信息說(shuō)明書和ATCC網(wǎng)站）。
開啟凍存管
1.準(zhǔn)備一個(gè)培養(yǎng)瓶，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說(shuō)明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）?！ ?br />
2.在37℃水浴中或細(xì)胞的正常生長(zhǎng)溫度下將凍存管輕輕搖動(dòng)。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來(lái)消毒。進(jìn)一步的操作均需在無(wú)菌操作臺(tái)中嚴(yán)格無(wú)菌條件下進(jìn)行。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個(gè)含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中。通過(guò)溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護(hù)劑（DMSO）。棄去上清，并用1或2 ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。將這些細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動(dòng)以徹底混勻。
5.培養(yǎng)24小時(shí)后檢查細(xì)胞狀態(tài)并在需要時(shí)進(jìn)行傳代。（見注2）
注2：某些細(xì)胞系，如雜交瘤細(xì)胞，需要幾天的時(shí)間才能從凍存狀態(tài)完全復(fù)蘇。某些雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)的第一天活力較差，并會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞碎片。在此之后，細(xì)胞就會(huì)開始復(fù)蘇，并進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)。
培養(yǎng)瓶培養(yǎng)
某些ATCC細(xì)胞，是在培養(yǎng)瓶中以活細(xì)胞的形式運(yùn)輸?shù)?。這些培養(yǎng)瓶中會(huì)接種細(xì)胞，孵育并保證細(xì)胞能生長(zhǎng)，然后補(bǔ)充滿培養(yǎng)基后再運(yùn)輸。
在收到培養(yǎng)瓶后，目視檢查培養(yǎng)基是否污染。包括異常的pH變化（苯酚紅變?yōu)辄S色或紫色），渾濁度，或有無(wú)顆粒。在低倍率（100×）的倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)基中是否有微生物污染以及細(xì)胞的形態(tài)。
如果細(xì)胞是單層貼壁生長(zhǎng)：
1.無(wú)菌操作，取出大約5至10ml的運(yùn)輸培養(yǎng)基。運(yùn)輸培養(yǎng)基可以保存在4℃?zhèn)溆谩?br />
2.將培養(yǎng)瓶放在產(chǎn)品說(shuō)明書中推薦的溫度和CO2濃度下培養(yǎng)（大多數(shù)細(xì)胞系為37℃與5%CO2）直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。
如果細(xì)胞不貼壁或是懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)：
1.在無(wú)菌條件下，將培養(yǎng)瓶的全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到離心管中。
2.在125×g轉(zhuǎn)速下離心5～10 min。
3.取出大約10 ml運(yùn)輸培養(yǎng)基的上清液，并重懸細(xì)胞。將取出的運(yùn)輸培養(yǎng)基儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?br />
4.無(wú)菌條件下，轉(zhuǎn)移懸浮細(xì)胞到25 cm2或75 cm2的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶大小取決于細(xì)胞株（見產(chǎn)品說(shuō)明書）。
5.按照產(chǎn)品說(shuō)明書中推薦的溫度和CO2濃度培養(yǎng)細(xì)胞，直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞來(lái)源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物，是多種類型細(xì)胞的混合物，保留了其來(lái)源組織的特點(diǎn)。
一段時(shí)間后，原代培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)達(dá)到融合狀態(tài)，即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細(xì)胞擴(kuò)增都被覆蓋。在此之后，細(xì)胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個(gè)細(xì)胞并且傳代（分裂，傳代或轉(zhuǎn)移）。在第一次傳代以后，培養(yǎng)物通常被稱為一個(gè)細(xì)胞系。每一次傳代培養(yǎng)，細(xì)胞群體由于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細(xì)胞也可以通過(guò)克隆，從培養(yǎng)物中選出。
二倍體細(xì)胞很少可以倍增超過(guò)幾代。它們只有有限的復(fù)制能力，并且在細(xì)胞倍增20至80次后開始減緩并最終停止分裂。最近的證據(jù)表明，某些細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞衰老與預(yù)計(jì)的復(fù)制性衰老不同，可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示，對(duì)某些物種的細(xì)胞系（尤其是人源的）即使生長(zhǎng)在改進(jìn)的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端（端粒）縮短調(diào)控的。
相反，傳代（或永生化）細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力。這些細(xì)胞系通過(guò)多種手段中的其中一種來(lái)使細(xì)胞永生化或轉(zhuǎn)化。許多傳代細(xì)胞來(lái)自腫瘤組織。ATCC收集的大部分細(xì)胞系是傳代的，只有少數(shù)如CCD-1117Sk人皮膚成纖維細(xì)胞（ATCC CRL-2465?）或CCD-18Co人結(jié)腸細(xì)胞（ATCC CRL-1459?）是有限傳代的。更多關(guān)于ATCC細(xì)胞永生化的信息可以在ATCC網(wǎng)站上查找。
正如以上提到的，細(xì)胞系要么在培養(yǎng)瓶表面貼壁生長(zhǎng)（錨定依賴性）要么懸浮生長(zhǎng)（非錨定依賴性）。細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，通常遵循一個(gè)由四個(gè)階段組成的特征性增長(zhǎng)模式：停滯期，對(duì)數(shù)期（指數(shù)期），平穩(wěn)期（平臺(tái)期）和衰退期。
停滯期——將細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶之后，細(xì)胞逐步恢復(fù)的同時(shí)，緩慢生長(zhǎng)。
對(duì)數(shù)期（指數(shù)期）——細(xì)胞進(jìn)入一個(gè)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的時(shí)期，一直持續(xù)到整個(gè)生長(zhǎng)表面被占滿或細(xì)胞密度超過(guò)培養(yǎng)基提供營(yíng)養(yǎng)的能力。
平穩(wěn)期——細(xì)胞增殖減慢或停止。
衰退期——如果不更換培養(yǎng)基且細(xì)胞數(shù)量不減少，細(xì)胞活力會(huì)下降，并出現(xiàn)細(xì)胞死亡。
原代細(xì)胞培養(yǎng)
原代細(xì)胞來(lái)源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物，是多種類型細(xì)胞的混合物，保留了其來(lái)源組織的特點(diǎn)。
一段時(shí)間后，原代培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)達(dá)到融合狀態(tài)，即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細(xì)胞擴(kuò)增都被覆蓋。在此之后，細(xì)胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個(gè)細(xì)胞并且傳代（分裂，傳代或轉(zhuǎn)移）。在第一次傳代以后，培養(yǎng)物通常被稱為一個(gè)細(xì)胞系。每一次傳代培養(yǎng)，細(xì)胞群體由于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細(xì)胞也可以通過(guò)克隆，從培養(yǎng)物中選出。
二倍體細(xì)胞很少可以倍增超過(guò)幾代。它們只有有限的復(fù)制能力，并且在細(xì)胞倍增20至80次后開始減緩并最終停止分裂。最近的證據(jù)表明，某些細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞衰老與預(yù)計(jì)的復(fù)制性衰老不同，可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示，對(duì)某些物種的細(xì)胞系（尤其是人源的）即使生長(zhǎng)在改進(jìn)的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端（端粒）縮短調(diào)控的。
相反，傳代（或永生化）細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力。這些細(xì)胞系通過(guò)多種手段中的其中一種來(lái)使細(xì)胞永生化或轉(zhuǎn)化。許多傳代細(xì)胞來(lái)自腫瘤組織。ATCC收集的大部分細(xì)胞系是傳代的，只有少數(shù)如CCD-1117Sk人皮膚成纖維細(xì)胞（ATCC CRL-2465?）或CCD-18Co人結(jié)腸細(xì)胞（ATCC CRL-1459?）是有限傳代的。更多關(guān)于ATCC細(xì)胞永生化的信息可以在ATCC網(wǎng)站上查找。
正如以上提到的，細(xì)胞系要么在培養(yǎng)瓶表面貼壁生長(zhǎng)（錨定依賴性）要么懸浮生長(zhǎng)（非錨定依賴性）。細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，通常遵循一個(gè)由四個(gè)階段組成的特征性增長(zhǎng)模式：停滯期，對(duì)數(shù)期（指數(shù)期），平穩(wěn)期（平臺(tái)期）和衰退期。
停滯期——將細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶之后，細(xì)胞逐步恢復(fù)的同時(shí)，緩慢生長(zhǎng)。
對(duì)數(shù)期（指數(shù)期）——細(xì)胞進(jìn)入一個(gè)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的時(shí)期，一直持續(xù)到整個(gè)生長(zhǎng)表面被占滿或細(xì)胞密度超過(guò)培養(yǎng)基提供營(yíng)養(yǎng)的能力。
平穩(wěn)期——細(xì)胞增殖減慢或停止。
衰退期——如果不更換培養(yǎng)基且細(xì)胞數(shù)量不減少，細(xì)胞活力會(huì)下降，并出現(xiàn)細(xì)胞死亡。
中國(guó)微生物查詢網(wǎng)（family998.com）