志賀氏菌增菌肉湯的工作原理與實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及具體操作步驟！
小楊 / 2025-11-19 09:59:08
一、志賀氏菌增菌肉湯的原理
志賀氏菌增菌肉湯是一種選擇性增菌培養(yǎng)基。它的主要目的不是讓志賀氏菌長(zhǎng)得非常旺盛，而是在抑制大多數(shù)其他腸道細(xì)菌（特別是
大腸桿菌）的同時(shí)，允許志賀氏菌進(jìn)行有限的生長(zhǎng)，從而提高樣品中志賀氏菌的相對(duì)比例，便于后續(xù)的分離和鑒定。
其原理主要基于以下幾個(gè)關(guān)鍵成分和設(shè)計(jì)：
1、基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物：
胰蛋白胨、牛肉浸粉等：提供氮源、維生素、氨基酸和碳源，滿足細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的基本營(yíng)養(yǎng)需求。
2、選擇性抑制劑（核心部分）：
脫氧膽酸鈉：這是一種膽鹽，也是核心的選擇性抑制劑。它能破壞革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞膜，并能抑制許多革蘭氏陰性桿菌（尤其是
大腸桿菌）的生長(zhǎng)。志賀氏菌對(duì)脫氧膽酸鈉的耐受性相對(duì)較強(qiáng)，因此能在其存在的環(huán)境下存活并緩慢生長(zhǎng)。
檸檬酸鈉/檸檬酸鹽：作為一種螯合劑，它能結(jié)合培養(yǎng)基中的鈣、鎂等二價(jià)陽(yáng)離子。這些離子是許多細(xì)菌（如
大腸桿菌）表面酶的輔因子，缺少它們會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞膜通透性改變，從而抑制其生長(zhǎng)。志賀氏菌對(duì)此相對(duì)不敏感。
葡萄糖：作為可發(fā)酵的碳水化合物，提供能量。
3、pH指示系統(tǒng)：
培養(yǎng)基中含有溴麝香草酚藍(lán)。這是一種pH指示劑，其變色范圍如下：
酸性 (pH < 6.0)：黃色
中性 (pH ≈ 6.0-7.6)：綠色
堿性 (pH > 7.6)：藍(lán)色
4、工作原理流程：
接種樣品后，如果樣品中含有志賀氏菌，它會(huì)利用葡萄糖進(jìn)行發(fā)酵。
發(fā)酵過(guò)程會(huì)產(chǎn)生酸性產(chǎn)物，使培養(yǎng)基的pH值下降。
當(dāng)pH降至6.0以下時(shí)，溴麝香草酚藍(lán)指示劑由綠色變?yōu)辄S色。
這個(gè)變酸的過(guò)程本身也會(huì)進(jìn)一步抑制對(duì)酸敏感的其他雜菌（如
大腸桿菌），從而為志賀氏菌創(chuàng)造了更有利的選擇性環(huán)境。
總結(jié)來(lái)說(shuō)：該培養(yǎng)基通過(guò)脫氧膽酸鈉和檸檬酸鹽的聯(lián)合作用，強(qiáng)力抑制雜菌；同時(shí)提供基本營(yíng)養(yǎng)讓志賀氏菌生長(zhǎng)；通過(guò)其發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使培養(yǎng)基變黃，這一酸性環(huán)境又形成二次選擇壓力，最終達(dá)到“富集”志賀氏菌的目的。
二、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象
在接種樣品并進(jìn)行培養(yǎng)后（通常在35-37°C下培養(yǎng)16-24小時(shí)），可以觀察到以下現(xiàn)象：
1、陽(yáng)性結(jié)果（提示可能有志賀氏菌）
培養(yǎng)基顏色：由接種前的綠色或藍(lán)綠色變?yōu)辄S色或黃綠色。
渾濁度：培養(yǎng)基變得輕微渾濁，表明有細(xì)菌生長(zhǎng)。
結(jié)論：顏色變黃表明有細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，且該細(xì)菌能夠耐受培養(yǎng)基中的選擇性抑制劑。這是一個(gè)初步的陽(yáng)性指示，需要立即轉(zhuǎn)種到選擇性更強(qiáng)的分離培養(yǎng)基（如SS瓊脂、XLD瓊脂或MAC瓊脂）上進(jìn)行進(jìn)一步分離和純化，然后通過(guò)生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。
2、陰性結(jié)果
培養(yǎng)基顏色：保持不變（綠色或藍(lán)綠色），或甚至可能變?yōu)楦畹乃{(lán)色。
不變色：說(shuō)明沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)，或生長(zhǎng)的細(xì)菌不發(fā)酵葡萄糖。
變藍(lán)色：極少數(shù)情況下，如果污染的雜菌能分解蛋白產(chǎn)生堿性物質(zhì)，會(huì)使培養(yǎng)基變藍(lán)，但這通常意味著嚴(yán)重污染。
渾濁度：澄清透明，無(wú)任何渾濁跡象。
結(jié)論：表明樣品中不含志賀氏菌，或志賀氏菌含量極低以致無(wú)法在抑制環(huán)境下生長(zhǎng)。
3、非典型或干擾結(jié)果
培養(yǎng)基劇烈變黃并產(chǎn)生大量氣泡：這通常不是志賀氏菌的特征。志賀氏菌不產(chǎn)氣。這種現(xiàn)象更可能來(lái)自其他腸桿菌科細(xì)菌（如
大腸桿菌）的污染，它們可能未被完全抑制并大量產(chǎn)酸產(chǎn)氣。
培養(yǎng)基變黃但非常渾濁：雖然志賀氏菌生長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致渾濁，但如果渾濁度非常高，也可能意味著選擇性抑制不完全，有其他耐受力強(qiáng)的雜菌大量生長(zhǎng)。
三、注意事項(xiàng)
培養(yǎng)時(shí)間：不宜過(guò)長(zhǎng)，通常為16-24小時(shí)。時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致被抑制的雜菌恢復(fù)生長(zhǎng)，干擾結(jié)果。
非100%特異性：該培養(yǎng)基是選擇性的，但不是特異性的。某些其他細(xì)菌（如某些
變形桿菌或
檸檬酸桿菌）也可能生長(zhǎng)并導(dǎo)致培養(yǎng)基變黃。因此，增菌后的分離和確認(rèn)步驟至關(guān)重要。
菌株差異：某些志賀氏菌菌株（特別是
宋內(nèi)志賀氏菌）對(duì)脫氧膽酸鹽比較敏感，可能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)不佳。
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