革蘭陰性桿菌分科顯色培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)及結(jié)果判讀！
小楊 / 2025-10-18 16:43:26
一、培養(yǎng)基的儲(chǔ)存和制備
1、儲(chǔ)存條件：
干粉培養(yǎng)基：應(yīng)密封保存于陰涼（<30°C）、干燥、避光處，并注意防潮。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上的有效期使用。
制備好的平板：通常需在2-8°C冰箱中避光保存。冷藏可減緩水分流失和成分降解，但也不宜長(zhǎng)期存放，一般建議在1-2周內(nèi)使用完畢。
2、制備過(guò)程：
水質(zhì)：必須使用純化水或蒸餾水，避免水中離子干擾。
精確稱量：嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的比例稱量干粉和水量，確保培養(yǎng)基濃度準(zhǔn)確。
加熱溶解與滅菌：多數(shù)培養(yǎng)基需要加熱煮沸使其完全溶解，并按照要求進(jìn)行高壓滅菌（通常為121°C, 15分鐘）。滅菌后應(yīng)迅速冷卻至約45-50°C（手摸瓶子不燙手為宜）。
添加劑：如果培養(yǎng)基需要額外添加抗生素或其他選擇性添加劑，必須在培養(yǎng)基滅菌并冷卻至適宜溫度后再加入，以免高溫破壞添加劑活性。加入后應(yīng)輕輕搖勻，避免產(chǎn)生氣泡。
傾注平板：在無(wú)菌條件下將培養(yǎng)基傾注入無(wú)菌平皿中，厚度要均勻（約4-5mm）。凝固后應(yīng)烘干表面冷凝水（如35°C培養(yǎng)箱中倒置放置15-30分鐘），以防菌落蔓延。
二、樣本接種和培養(yǎng)
樣本質(zhì)量：確保接種的樣本是新鮮、有代表性的。對(duì)于臨床樣本，應(yīng)優(yōu)先選擇膿液、分泌物等原液進(jìn)行接種，必要時(shí)進(jìn)行增菌培養(yǎng)。
1、接種方法：
采用分區(qū)劃線法，以獲得單個(gè)、分散的菌落，便于觀察和純化。
接種量要適中，過(guò)密會(huì)導(dǎo)致菌落融合，顏色相互干擾，難以判讀。
2、培養(yǎng)條件：
溫度和時(shí)間：通常為35-37°C，需氧培養(yǎng)18-24小時(shí)。有些菌生長(zhǎng)緩慢或顯色反應(yīng)需要更長(zhǎng)時(shí)間，可延長(zhǎng)至48小時(shí)觀察，但需注意隨時(shí)間延長(zhǎng)，顏色可能發(fā)生變化。
濕度：培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)保持一定的濕度，防止培養(yǎng)基干裂。
三、結(jié)果判讀與解釋
這是使用顯色培養(yǎng)基最核心也最容易出錯(cuò)的環(huán)節(jié)。
嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)：不同品牌、不同型號(hào)的顯色培養(yǎng)基，其菌落顏色與對(duì)應(yīng)菌種的關(guān)聯(lián)性可能不同！ 判讀時(shí)必須參照當(dāng)前使用產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)或判讀指南。
典型菌落觀察：重點(diǎn)觀察孤立菌落的顏色和形態(tài)。常見(jiàn)的顏色指示例如（僅供參考，具體以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)）：
沙門菌屬：無(wú)色、透明或紫色（帶有黑色中心）。
注意非典型反應(yīng)：
菌落變異：同一菌種的不同菌株可能產(chǎn)生顏色差異。
混合顏色：如果一個(gè)菌落顯示出混合顏色，可能是純化不徹底，需要重新劃線分離。
弱反應(yīng)或延遲反應(yīng)：某些菌可能顯色較慢或顏色較淺，需延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間后再次觀察。
局限性：顯色培養(yǎng)基是初篩工具，不能作為最終鑒定依據(jù)。它通常只能鑒定到“屬”或“群”的水平，無(wú)法替代生化試驗(yàn)、質(zhì)譜或分子生物學(xué)等確證方法。
四、質(zhì)量控制
無(wú)菌試驗(yàn)：每批新制備的培養(yǎng)基應(yīng)隨機(jī)抽取1-2個(gè)平板，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)，確認(rèn)無(wú)任何微生物生長(zhǎng)。
性能驗(yàn)證（生長(zhǎng)試驗(yàn)）：使用標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)證培養(yǎng)基的選擇性和顯色特性是否合格。例如：
五、生物安全與廢棄物處理
生物安全：處理可能含有致病菌的樣本和培養(yǎng)后的平板時(shí)，必須在相應(yīng)級(jí)別的生物安全柜中進(jìn)行，并做好個(gè)人防護(hù)（穿白大褂、戴手套）。
廢棄物處理：所有使用過(guò)的培養(yǎng)基、平板均被視為生物危險(xiǎn)廢棄物，必須經(jīng)過(guò)高壓蒸汽滅菌或其他有效方式滅活后，才能丟棄或清洗。
六、總結(jié)要點(diǎn)
階段 核心注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存制備 避光防潮、精確稱量、正確滅菌與冷卻、及時(shí)使用
接種培養(yǎng) 新鮮樣本、分區(qū)劃線、適宜溫濕度、規(guī)定時(shí)間
結(jié)果判讀 以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)、觀察單菌落、注意非典型反應(yīng)、明確其初篩局限性
質(zhì)量控制 定期進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)菌株性能驗(yàn)證
安全環(huán)保 遵守生物安全規(guī)程，廢棄物必須先滅菌后處理
遵循以上注意事項(xiàng)，才能確保革蘭陰性桿菌分科顯色培養(yǎng)基發(fā)揮其快速、簡(jiǎn)便的初篩優(yōu)勢(shì)，為后續(xù)的精確鑒定提供可靠的基礎(chǔ)。
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