真菌瓊脂培養(yǎng)基的原理與使用方法及注意事項(xiàng)與常見問題！
小楊 / 2025-05-26 08:57:50
一、原理
營(yíng)養(yǎng)成分：
含碳源（如葡萄糖、麥芽糖）、氮源（如蛋白胨、酵母提取物）及無機(jī)鹽，滿足真菌生長(zhǎng)需求。
部分培養(yǎng)基可能添加抗生素（如氯霉素、慶大霉素），抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，提高選擇性。
pH調(diào)節(jié)：
通常調(diào)至弱酸性（pH 5.6-5.8），適合真菌生長(zhǎng)，抑制細(xì)菌繁殖。
瓊脂作用：
瓊脂作為凝固劑（濃度1.5-2%），提供固體支撐，便于觀察菌落形態(tài)。
二、使用方法
1、配制培養(yǎng)基
按說明書比例稱取培養(yǎng)基干粉，加入蒸餾水，攪拌溶解。
加熱至沸騰，確保完全溶解。
分裝至錐形瓶或試管中，用棉塞或透氣封口膜封口。
2、滅菌
高壓蒸汽滅菌：121℃、15-20分鐘（液體培養(yǎng)基需縮短時(shí)間以防成分破壞）。
3、倒平板
滅菌后冷卻至約50℃（避免燙傷或冷凝水過多）。
在無菌操作臺(tái)內(nèi)倒入無菌培養(yǎng)皿（厚度約3-4mm），靜置凝固。
4、接種與培養(yǎng)
接種方法：
劃線法：用接種環(huán)蘸取樣品，在瓊脂表面劃“之”字形。
涂布法：將樣品稀釋液均勻涂布于平板表面。
點(diǎn)植法：適用于霉菌，用接種針將菌絲塊置于培養(yǎng)基中心。
培養(yǎng)條件：
溫度：25-28℃（多數(shù)真菌）或37℃（部分致病性真菌）。
濕度：保持濕潤(rùn)（可放置于培養(yǎng)箱或密封袋中）。
時(shí)間：2-7天（酵母菌較快，霉菌較慢）。
5、觀察與保存
定期觀察菌落形態(tài)（顏色、質(zhì)地、邊緣等）。
純化后菌種可短期冷藏（4℃）或長(zhǎng)期冷凍保存（-80℃）。
三、注意事項(xiàng)
嚴(yán)格無菌操作，避免污染。
若培養(yǎng)基含抗生素，需在滅菌后冷卻至50℃以下添加（避免高溫失效）。
不同真菌對(duì)pH、溫度敏感，需根據(jù)目標(biāo)菌種調(diào)整條件。
廢棄培養(yǎng)基需高壓滅菌后處理，防止病原擴(kuò)散。
四、常見問題
污染：檢查滅菌條件或操作是否規(guī)范。
真菌不生長(zhǎng)：調(diào)整培養(yǎng)基配方或培養(yǎng)條件。
瓊脂不凝固：可能因滅菌時(shí)間過長(zhǎng)或pH不當(dāng)導(dǎo)致瓊脂分解。
通過以上步驟，可有效培養(yǎng)和觀察真菌，適用于科研、臨床或工業(yè)應(yīng)用。
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