支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響與預(yù)防及處理與檢測(cè)方法！
小楊 / 2025-05-19 09:55:35
百歐博偉生物：支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果具有顯著影響，具體表現(xiàn)及應(yīng)對(duì)措施如下：
一、支原體污染的影響
1、細(xì)胞生長(zhǎng)異常：
增殖減緩或停滯：支原體競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)（如氨基酸、核苷酸），導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受阻。
形態(tài)改變：細(xì)胞可能變圓、收縮或出現(xiàn)空泡化。
2、代謝干擾：
消耗關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如葡萄糖、精氨酸），改變培養(yǎng)基pH值。
釋放有毒代謝產(chǎn)物（如過氧化氫），損傷細(xì)胞膜或DNA。
3、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真：
基因表達(dá)異常：干擾細(xì)胞信號(hào)通路，導(dǎo)致mRNA和蛋白表達(dá)異常。
藥物反應(yīng)偏差：影響藥物敏感性測(cè)試結(jié)果（如化療藥效評(píng)估）。
4、隱蔽性與傳播風(fēng)險(xiǎn)：
支原體體積?。?.2-0.3 μm），常規(guī)顯微鏡難以檢測(cè)，易通過氣溶膠或操作交叉污染擴(kuò)散。
二、檢測(cè)方法
1、PCR檢測(cè)：快速（2-3小時(shí)）、高靈敏度（可檢測(cè)低至1-10 CFU/mL），常用特異性引物。
2、熒光染色法：使用Hoechst 33342染色DNA，熒光顯微鏡下可見支原體顆粒（需高倍鏡觀察）。
3、培養(yǎng)法：耗時(shí)（2-4周），需專用培養(yǎng)基，適合科研級(jí)驗(yàn)證。
三、處理與預(yù)防
1、污染后處理：
清除試劑：（針對(duì)支原體核糖體，使用7-14天），需驗(yàn)證細(xì)胞毒性。
徹底滅菌：丟棄污染細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)箱、試劑進(jìn)行滅活處理（如過氧乙酸熏蒸）。
2、預(yù)防措施：
嚴(yán)格無菌操作：使用二級(jí)生物安全柜，定期更換HEPA濾膜。
定期檢測(cè)：每1-2個(gè)月PCR篩查，新進(jìn)細(xì)胞系需隔離檢測(cè)。
使用滅活血清：γ射線處理的胎牛血清（FBS）降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
細(xì)胞庫(kù)管理：凍存無污染主細(xì)胞庫(kù)，避免反復(fù)傳代。
四、特殊案例與注意事項(xiàng)
1、病毒生產(chǎn)：支原體可能抑制病毒包裝（如慢病毒產(chǎn)量下降50%以上）。
2、干細(xì)胞研究：污染導(dǎo)致多能性標(biāo)志物表達(dá)異常，影響分化效率。
3、長(zhǎng)期影響：即使清除，部分細(xì)胞可能遺留表觀遺傳改變（如甲基化模式異常）。
綜上，支原體污染對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的威脅不容忽視，需通過系統(tǒng)性的檢測(cè)、清除及預(yù)防策略保障實(shí)驗(yàn)可靠性。
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