厭氧性細(xì)菌鑒別技術(shù)的形態(tài)學(xué)與生化反應(yīng)及傳統(tǒng)培養(yǎng)！
小楊 / 2025-04-25 09:39:38
百歐博偉生物：厭氧性細(xì)菌的鑒別技術(shù)涉及多種傳統(tǒng)和現(xiàn)代方法，結(jié)合微生物學(xué)、分子生物學(xué)及生物化學(xué)手段。以下是主要鑒別技術(shù)的系統(tǒng)總結(jié)：
一、傳統(tǒng)培養(yǎng)與形態(tài)學(xué)鑒定
1、厭氧培養(yǎng)技術(shù)
厭氧環(huán)境創(chuàng)建：使用厭氧罐配合產(chǎn)氣袋或厭氧工作站，維持O?濃度<1%。
選擇性培養(yǎng)基：
含還原劑（如半胱氨酸、硫乙醇酸鹽）的液體或固體培養(yǎng)基（如GAM培養(yǎng)基、CDC厭氧血瓊脂）。
添加抗生素抑制需氧菌生長(zhǎng)（如卡那霉素/萬古霉素血瓊脂）。
培養(yǎng)觀察：嚴(yán)格厭氧菌僅在深層或厭氧區(qū)生長(zhǎng)，微需氧菌可能靠近有氧區(qū)。
2、形態(tài)學(xué)與染色
革蘭染色：初步區(qū)分革蘭陽(yáng)性（如
梭菌屬 Clostridium）與陰性（如
擬桿菌屬 Bacteroides）。
芽孢染色（如孔雀綠染色）：鑒定產(chǎn)芽孢厭氧菌（如
艱難梭菌 C. difficile）。
顯微鏡觀察：形態(tài)（桿狀、球狀）、排列方式（鏈狀、成簇）等特征輔助鑒別。
二、生化反應(yīng)鑒定
1、生化試驗(yàn)
代謝產(chǎn)物分析：檢測(cè)短鏈脂肪酸（如丙酸、丁酸）的氣相色譜（GC）或高效液相色譜（HPLC）。
酶活性檢測(cè)：
API 20A系統(tǒng)：通過20項(xiàng)生化反應(yīng)（如明膠液化、糖發(fā)酵）鑒定常見厭氧菌。
產(chǎn)吲哚、硝酸鹽還原試驗(yàn)：區(qū)分?jǐn)M桿菌屬與其他革蘭陰性厭氧菌。
2、抗生素敏感性
甲硝唑（滅滴靈）敏感性測(cè)試：多數(shù)嚴(yán)格厭氧菌對(duì)甲硝唑敏感，而耐藥的可能是微需氧菌。
三、分子生物學(xué)技術(shù)
1、16S rRNA基因測(cè)序
黃金標(biāo)準(zhǔn)：通過PCR擴(kuò)增16S rRNA基因并測(cè)序，比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定至種水平。
引物設(shè)計(jì)：通用引物或厭氧菌特異性引物提高靈敏度。
2、熒光原位雜交（FISH）
使用種屬特異性熒光探針（如針對(duì)脆弱擬桿菌 B. fragilis 的探針）直接檢測(cè)臨床樣本中的厭氧菌。
3、多重PCR與實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）
針對(duì)毒力基因（如艱難梭菌的毒素基因 tcdA/tcdB）或耐藥基因（如擬桿菌屬的 cfxA）快速檢測(cè)。
四、質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF MS）
1、原理：通過細(xì)菌蛋白質(zhì)譜與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)實(shí)現(xiàn)快速鑒定（數(shù)分鐘內(nèi)）。
2、優(yōu)勢(shì)：無需純培養(yǎng)（部分系統(tǒng)支持直接涂片），但對(duì)部分厭氧菌（如
梭菌屬）的數(shù)據(jù)庫(kù)覆蓋仍需完善。
五、宏基因組測(cè)序與代謝組學(xué)
1、宏基因組測(cè)序
直接對(duì)樣本DNA進(jìn)行高通量測(cè)序，無需培養(yǎng)，可檢測(cè)不可培養(yǎng)的厭氧菌（如部分口腔或腸道共生菌）。
2、代謝組學(xué)
分析厭氧菌特有的代謝產(chǎn)物（如丁酸、硫化氫）輔助鑒定。
六、臨床樣本處理注意事項(xiàng)
1、標(biāo)本采集：避免接觸氧氣（使用厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)瓶或含還原劑的拭子）。
2、快速處理：樣本需在30分鐘內(nèi)接種，防止氧氣暴露導(dǎo)致細(xì)菌死亡。
七、技術(shù)選擇建議
場(chǎng)景 推薦技術(shù)
常規(guī)臨床診斷 MALDI-TOF MS + 快速生化試驗(yàn)
疑難菌株鑒定 16S rRNA測(cè)序 + 表型分析
研究或不可培養(yǎng)菌分析 宏基因組測(cè)序 + 單細(xì)胞基因組學(xué)
八、總結(jié)
厭氧菌鑒定需結(jié)合傳統(tǒng)培養(yǎng)與現(xiàn)代技術(shù)，分子生物學(xué)方法顯著提升了準(zhǔn)確性和效率，但傳統(tǒng)生化試驗(yàn)在資源有限條件下仍具價(jià)值。臨床應(yīng)用中需特別注意樣本處理以避免假陰性結(jié)果。
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