精氨酸支原體的培養(yǎng)與檢測(cè)方法及質(zhì)量控制與注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-04-17 09:08:40
精氨酸支原體是一種依賴精氨酸作為代謝底物的支原體，其檢測(cè)和培養(yǎng)方法在藥品和生物制品的質(zhì)量控制中具有重要應(yīng)用。以下基于搜索結(jié)果對(duì)精氨酸支原體的培養(yǎng)基、檢測(cè)原理及方法進(jìn)行綜合說(shuō)明：
一、培養(yǎng)基類型及成分
精氨酸支原體的檢測(cè)通常采用以下三種培養(yǎng)基形式，核心成分相似但形態(tài)不同：
1、肉湯培養(yǎng)基
成分：豬胃消化物（10.0 g/L）、牛肉浸粉（5.0 g/L）、酵母浸粉（5.0 g/L）、氯化鈉（2.5 g/L）、葡萄糖（1.0 g/L）、L-精氨酸（2.0 g/L）、酚紅（0.02 g/L），pH 7.1±0.2。
特點(diǎn)：液體形態(tài)，需添加20%滅活血清（如小牛血清）及青霉素（80萬(wàn)單位/L）以抑制雜菌生長(zhǎng)。
2、半流體培養(yǎng)基
成分：在肉湯基礎(chǔ)上添加瓊脂（2.5 g/L），形成半固態(tài)環(huán)境，便于觀察支原體運(yùn)動(dòng)性。
3、瓊脂培養(yǎng)基
成分：瓊脂含量更高（15.0 g/L），用于固體培養(yǎng)以觀察菌落形態(tài)。
二、檢測(cè)原理
1、代謝反應(yīng)
支原體通過(guò)分解L-精氨酸產(chǎn)生堿性代謝物（如氨），使培養(yǎng)基pH升高，酚紅指示劑由橙黃色變?yōu)榧t色。
2、選擇性抑制
添加青霉素抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，血清提供支原體必需的脂類及生長(zhǎng)因子。
三、檢測(cè)方法（以《中國(guó)藥典》2020版為依據(jù)）
1、樣品接種
將待測(cè)樣品稀釋至10?³~10??梯度，接種3支培養(yǎng)基管。
2、培養(yǎng)條件
溫度：36±1℃，環(huán)境：需氧或微需氧（部分培養(yǎng)基需封口膜封口）。
時(shí)間：7-14天，觀察顏色變化或菌落形成。
3、結(jié)果判讀
陽(yáng)性：培養(yǎng)基變紅（肉湯）或形成典型“荷包蛋”狀菌落（瓊脂）。
陰性：無(wú)顏色變化且對(duì)照試驗(yàn)符合要求。
四、質(zhì)量控制與注意事項(xiàng)
1、質(zhì)控菌株
2、理化指標(biāo)
培養(yǎng)基粉末需為均勻淡黃色，溶液透明無(wú)雜質(zhì)，pH值7.1±0.2。
3、操作規(guī)范
避免滅菌后冷凝水污染，試管口需灼燒處理。
過(guò)期、變色或污染的培養(yǎng)基禁止使用。
五、應(yīng)用與擴(kuò)展
1、核酸檢測(cè)
精氨酸支原體的核酸參考品可用于PCR試劑盒的陽(yáng)性對(duì)照及交叉反應(yīng)驗(yàn)證。
2、工業(yè)微生物檢測(cè)
廣泛用于疫苗、細(xì)胞培養(yǎng)物及生物制品的支原體污染篩查。
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