平板劃線分離法的實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-03-14 09:53:18
平板劃線分離法是微生物學(xué)中用于分離純化微生物（如
細(xì)菌、
真菌等）的常用技術(shù)，通過(guò)物理稀釋樣品中的微生物，最終獲得單個(gè)菌落（由單一微生物繁殖形成的群體）。以下是該方法的詳細(xì)說(shuō)明：
一、操作步驟
1、準(zhǔn)備材料
固體培養(yǎng)基平板（如營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板）。
接種環(huán)（金屬或一次性塑料材質(zhì)）。
待分離的微生物樣品（如菌液或混合菌懸液）。
酒精燈（用于無(wú)菌操作）。
2、滅菌接種環(huán)
將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒至紅熱，冷卻數(shù)秒（避免高溫殺死微生物）。
3、蘸取樣品
用冷卻后的接種環(huán)蘸取少量菌液（或挑取少量菌苔）。
4、劃線分離
第一區(qū)劃線：在平板表面輕輕劃3-5條密集的“之”字形線條（約占平板1/4面積）。
第二區(qū)劃線：灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)的末端延伸劃出3-5條線（約占平板1/4面積）。
第三、四區(qū)劃線：重復(fù)灼燒、冷卻和劃線步驟，逐漸稀釋菌液（如圖示，后一區(qū)與前區(qū)部分重疊）。
5、培養(yǎng)
倒置平板，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（溫度和時(shí)間依微生物種類而定）。
二、原理
1、物理稀釋：通過(guò)多次劃線，微生物被逐漸分散，最終在第四區(qū)形成單個(gè)菌落。
2、固體培養(yǎng)基：固定微生物位置，菌落只能在劃線處生長(zhǎng)，便于觀察和挑取。
三、注意事項(xiàng)
1、無(wú)菌操作
全程靠近酒精燈火焰操作，避免雜菌污染。
每次劃線前需灼燒接種環(huán)，冷卻后再接觸菌液。
2、手法輕柔
劃線時(shí)勿刺破培養(yǎng)基表面，以免菌體在內(nèi)部生長(zhǎng)。
3、控制稀釋度
若最終區(qū)域無(wú)單菌落，可能因初始菌液濃度過(guò)高，需重新稀釋樣品。
4、標(biāo)記與記錄
標(biāo)記平板分區(qū)及樣品信息，培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)并記錄。
四、應(yīng)用
分離純培養(yǎng)物（獲得單一菌種）。
觀察微生物菌落形態(tài)（顏色、大小、邊緣等）。
用于菌種鑒定、保存或進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)（如抗生素敏感性試驗(yàn)）。
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