PBMC人外周血單核細胞的復蘇與傳代及凍存操作說明！
小楊 / 2025-02-11 09:13:22
細胞簡介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：PBMC
產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2
細胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6
保存溫度：37℃；-198℃
運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸
安全等級：1
用途：限制僅供科研1類
培養(yǎng)體系：90%DMEM+10%FBS+1%三抗
培養(yǎng)溫度：37℃
二氧化碳濃度：5%
注釋：倍增時間45h
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需復蘇的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化。
2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子，移液槍吸出細胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上完全培養(yǎng)基并混勻。
3、操作離心，調(diào)至 1000 轉/分 ，時長 10 分鐘。
4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細胞沉淀，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 完全培養(yǎng)基，計數(shù)，調(diào)整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶 ，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6、注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中。
細胞傳代操作說明（貼壁細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、細胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達到 80% ，可進行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計，吸出完全培養(yǎng)基，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具體時間視細胞而定），后用完全培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細胞，鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮完全培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。
細胞傳代操作說明（懸浮細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、細胞于培養(yǎng)箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計，吹打均勻，吸出完全培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細胞，鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。
細胞凍存操作說明
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需凍存的細胞，移液槍 ，槍頭 ，離心管，凍存管，記號筆
實驗步驟：
1、取待凍存的細胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min，用完全培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。
2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。
3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。
4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉放-20℃ 1.5～2 h ，再轉人-70℃ 4-12 h 后即可轉移到液氮內(nèi)(- 196℃) ，并登記。
注意事項
1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2、收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3、由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5、客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術問題可以撥打技術售后服務電話：010-53515223，我們隨時給予解答。
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