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 細胞介紹

來自52 歲男性鱗狀細胞癌患者鼻中隔轉(zhuǎn)移胸腔積液的一種廣泛的鼻中隔惡性腫瘤，診斷為間變性鱗狀細胞癌。具有準二倍體核型 (RPMI 2650) 的人腫瘤細胞系，穩(wěn)定的染色體數(shù)目和可能來源于惡性細胞使細胞系獨特的永久人類細胞系。通過免疫過氧化物酶染色，細胞對角蛋白呈陽性  可用于癌癥研究和毒理學(xué)。

細胞特性

1） 來源：52 歲男性鱗狀細胞癌患者鼻中隔

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,貼壁生長，細胞非常小，成簇生長，融合形成厚層

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

 注意：細胞附著在簇中，細胞會堆積，培養(yǎng)物不會 100% 匯合。傳代時為避免結(jié)塊，在等待細胞分離時不要通過敲擊或搖動燒瓶來攪動細胞。難以分離的細胞可置于 37°C 以促進分散。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

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