穩(wěn)定表達(dá)Ovalbumin基因的細(xì)胞株
細(xì)胞名稱(chēng): 示蹤穩(wěn)定細(xì)胞株
規(guī)格: T25
形態(tài)特征: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁
貨期: 2周【培養(yǎng)條件】RPMI 1640(Gibco cat:11875,或同配方) 10%胎牛血清
【推薦培養(yǎng)試劑】
【傳代比例】1:4傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】消化2-3分鐘
【換液頻率】2~3天換液1次
【凍存液配方】RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO
【難度等級(jí)】++
【培養(yǎng)要點(diǎn)】使用DMEM高糖培養(yǎng)基會(huì)使細(xì)胞大量產(chǎn)生黑色素
【特征特性】該細(xì)胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤,可以產(chǎn)生黑色素,同基因小鼠體內(nèi)移植可成瘤。
藥篩:通過(guò)慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組,使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進(jìn)行觀察,標(biāo)記后的細(xì)胞非常容易進(jìn)行追蹤檢測(cè)。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性,為增強(qiáng)細(xì)胞熒光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。
正常培養(yǎng)過(guò)程中定期(一個(gè)月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復(fù)蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過(guò)程中每天都加藥。