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鑒定正確

 

通過(guò)STR鑒定

 

凍存條件

 

無(wú)血清凍存液

 

傳代方法

 

第一次建議1:2傳代 

 

傳代情況

 

2~3天換液/傳代

 

細(xì)胞描述

 

 這些細(xì)胞含有一個(gè)HTLV III（HIV，LAV）前病毒基因組缺陷。 除p64和p34蛋白外，所有主要結(jié)構(gòu)蛋白均組成性表達(dá)。 無(wú)傳染性病毒產(chǎn)生；然而，與Leu-3+細(xì)胞共同培養(yǎng)可導(dǎo)致合胞體形成

 

備注

 

懸浮細(xì)胞請(qǐng)離心收集，并用無(wú)菌離心管收集瓶子中培養(yǎng)基，留作過(guò)渡對(duì)比培養(yǎng)。如果對(duì)比培養(yǎng)效果不好，建議直接購(gòu)買我們的完全培養(yǎng)基。

 

細(xì)胞收到后處理

 

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)）

 

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 

細(xì)胞傳代：如果未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代：

 

a、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

 

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

 

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

 

b、細(xì)胞凍存：

 

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

 

離心5min；

 

2、棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml/支無(wú)血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無(wú)血清凍存液即可）

 

3、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

 

放 24 小時(shí)以上。

 

C、細(xì)胞復(fù)蘇：

 

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

 

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

 

3、棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

 

4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。