細胞名稱：H1
細胞描述：人胚胎干細胞，曾用名WA01
形 態(tài)：球形克隆，貼壁生長
來源性別：男性
組織：內(nèi)細胞團
凍存日期/代數(shù)：詳見 凍存管/培養(yǎng)瓶 標識
建議復蘇培養(yǎng)體系：1 個 T25 培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿
細胞狀態(tài)：良好
支原體檢測結果：陰性
細胞用途：僅供科研使用。
STR鑒定結果：
D5S818 9 11
D13S317 8 11
D7S820 8 12
D16S539 9 13
VWA 15 17
TH01 9.3 13
AMEL X Y
TPOX 8 8
CSF1PO 12 13
H1細胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人胚胎干細胞
1.培養(yǎng)試劑和材料準備
2.培養(yǎng)流程
2.1.復蘇
在開始復蘇前，將所有試管、預熱后的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿準備好，已確保盡快完成復蘇過程。
1. 將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續(xù)地搖動凍存管，直到只剩下一個小冷凍團。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進行消毒。
2. 使用移液管將凍存管中含有H9細胞的凍存液輕輕轉移至一個含有5-6mL已經(jīng)預熱的完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，過程必須輕柔防止吹散細胞團。
3. 室溫300g離心5min。
4. 吸出培養(yǎng)基，確保細胞團完整。
5. 然后緩慢加入1mL完全培養(yǎng)基，用手指輕彈離心管底部，使細胞團脫離底部并分散。
6. 輕輕的將此1mL細胞懸液轉移至已包被的培養(yǎng)皿/板/瓶，根據(jù)最終培養(yǎng)細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
7. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預熱）。
2.2.傳代
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
1. 傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
2. 吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細胞成團脫落。
5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
6. 移入離心管，300g離心5min，
7. 離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
8. 傳代比例為 1：6—1：8，根據(jù)最終培養(yǎng)細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
9. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預熱）。
2.3.凍存
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
1. 傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
2. 吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細胞成團脫落。
5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
6. 移入離心管，300g離心5min。
7. 離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
8. 使用預冷的凍存液輕輕的重懸細胞團，然后將細胞懸液轉移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90%H9細胞完全培養(yǎng)基與 10%的DMSO。
