細胞描述：將人包皮細胞誘導成 iPS 細胞，通過重編程轉錄因子為：OCT4、SOX2、KLF4、
MYC 誘導建立 iPS 細胞，培養(yǎng)時無需飼養(yǎng)層細胞。
形 態(tài)：球形克隆
來源性別：男性疾 ?。航】?br />
年 齡：新生兒
細胞來源：從 ATCC 引進（http://www.atcc.org/）
ATCC number: ACS-1011TM
凍存日期/代數(shù)：詳見 凍存管/培養(yǎng)瓶 標識建議復蘇培養(yǎng)體系：1 個 T25 培養(yǎng)瓶
細胞狀態(tài)：良好
支原體檢測結果：陰性
運輸方式：干冰運輸
細胞用途：僅供科研使用。
iPS細胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人胚胎干細胞
1.培養(yǎng)試劑和材料準備（詳見培養(yǎng)基及相關試劑）
2.培養(yǎng)流程
2.1.復蘇
在開始復蘇前，將所有試管、預熱后的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿準備好，已確保盡快完成復蘇過程。
將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續(xù)地搖動凍存管，直到只剩下一個小冷凍團。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進行消毒。
使用移液管將凍存管中含有iPS細胞的凍存液輕輕轉移至一個含有5-6mL已經預熱的完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，過程必須輕柔防止吹散細胞團。
室溫300g離心5min。
吸出培養(yǎng)基，確保細胞團完整。
然后緩慢加入1mL完全培養(yǎng)基，用手指輕彈離心管底部，使細胞團脫離底部并分散。
輕輕的將此1mL細胞懸液轉移至已包被的培養(yǎng)皿/板/瓶，根據(jù)最終培養(yǎng)細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預熱）。
2.2.傳代
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內部大部分細胞成團脫落。
加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
移入離心管，300g離心5min，
離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
傳代比例為 1：6—1：8，根據(jù)最終培養(yǎng)細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預熱）。
2.3.凍存
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內部大部分細胞成團脫落。
加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
移入離心管，300g離心5min。
離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
使用預冷的凍存液輕輕的重懸細胞團，然后將細胞懸液轉移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90% iPS細胞完全培養(yǎng)基與 10%的DMSO。
